精神分裂病関連遺伝子群の解明:逆耐性現象からのアプローチ

阐明精神分裂症相关基因：从反向耐受现象入手

基本信息

批准号：
02J61452
负责人：
柴田篤志
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1.前年度に構築したmGluR3 targeting vectorをelectroporationにより129 strain mouse由来のES細胞へ導入し、G418とgancicrovirを用いてselectionを行った。selectionの後、ES細胞のcolonyを単離し、Southern blotting行った結果、mGluR3遺伝子内でmGluR3 targeting vectorと相同組み換えを起こした組換え体ES細胞を4 clones得ることができた。2.得られた4 clonesのmGluR3遺伝子組換え体ES細胞をそれぞれB6 strain mice由来のblastcystesへinjectionし、それらを仮親となるpseudo-pregnancy mice (ICR strain)の子宮へ移植することにより、各々のcloneからchimera mice(chimera rate=5-90%)を得た。3.得られたchimera miceをそれぞれB6 strain miceと交配させたところ、1匹のchimera mouse (chimera rate=90%)において、ES細胞がgermlineへtransmitされていることが確認された。これをさらに交配させ、ES細胞に由来するF1 miceを22匹得ており、mGluR3遺伝子に関してgenotypingを行ったが、全てwild typeであった。このことから、mGluR3はmouseの発生において非常に重要であり、hetero-knockoutでもlethalとなる可能性が示唆された。4.そこで、上で得られたmGluR3組換え体ES細胞(hetero-knockout)を高濃度のG418存在下で培養することによりmGluR3 homo-knockoutのES細胞を作成し、これにレチノイン酸等よる処理を施して、神経系への分化誘導を試みた。現在、その詳細を解析することにより、神経系発生におけるmGluR3の機能の解明を進めている。

1。上一年构建的MGLUR3靶向载体被引入通过电穿孔衍生自129个菌株小鼠的ES细胞，并使用G418和Gancicrovir选择。选择后，分离了ES细胞的菌落并进行了南部印迹，并获得了MGLUR3基因内的MGLUR3靶向载体的4个重组ES细胞的克隆。 2。将获得的4个MGLUR3重组ES细胞的克隆注射到源自B6菌株小鼠的爆炸性细胞中，然后将其植入伪孕症小鼠的子宫（ICR菌株），从而获得嵌合体小鼠（从每个克隆中获得嵌合体速率= 5-90％）。 3。当获得的嵌合小鼠与B6菌株小鼠配对时，可以证实ES细胞在一只嵌合小鼠中传播到种系（嵌合速率= 90％）。进一步跨越了从ES细胞得出的22只F1小鼠，并在MGLUR3基因上进行基因分型，但所有这些都是野生型。这表明MGLUR3在小鼠的发育中极为重要，并且异质敲除也可能导致致命。 4。因此，在高浓度的G418存在下培养了上述MGLUR3重组ES细胞（异质敲除），以创建MGLUR3均匀敲除ES细胞，并用视黄酸或类似的类似的治疗，这些细胞用视黄酸治疗。当前，通过分析细节，我们正在努力阐明MGLUR3在神经系统发展中的功能。