慢性関節リウマチ滑膜における包括的ゲノム解析

类风湿性关节炎滑膜的全面基因组分析

• 批准号: 02J61407
• 负责人: 櫻井 大祐
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J61407/
• 关键词: Id; RA(関節リウマチ); 血管内皮細胞; 血管新生; RNAi; FRP; 滑膜細胞

昨年度の研究結果によって得られた、Id遺伝子を血管内皮細胞に強制発現させることによって、血管内皮細胞の活性化、増殖能の亢進、血管新生様表現型の誘導が起こるという知見から、今年度はIdの発現抑制を行なうことによって、血管内皮の活性化および血管新生の誘導を阻害できるかという課題に取り組んだ。RNA高発現ベクターを用いて、Id1およびId3特異的なshRNAを強制発現させることによってId遺伝子の発現阻害を行なった。あらかじめId発現阻害ベクターをトランスフェクションしたヒト臍帯状脈由来血管内皮細胞(HUVEC)に対して、VEGF処理をすることによって血管内皮細胞の活性化、血管新生の誘導、ならびにId遺伝子の発現誘導を行なっ。結果Id1/Id3遺伝子の発現は誘導されず、細胞増殖能もネガティブコントロールベクターで処理したものに比べ抑えられ、VEGF非刺激のものと同様の細胞増殖であった。αv、α2、β1インテグリン、ICAM-1、E-selectinといった活性化マーカーでもある接着分子の発現量も、未処理のものと同程度の発現であり、細胞遊走能、MMP2産生量、管空形成能といった血管新生表現型もVEGF刺激下においても誘導することができなかった。以上のin vitroでの実験結果をvivoにおいて検証する目的でin vivoマトリゲルアッセイを行なった。あらかじめVEGF100ng/mlの濃度で調整したマトリゲルに、仙台ウイルスのエンベロープで覆ったId1/Id3 shRNA発現ベクター、ならびにmockベクターをそれぞれ加え、B6マウスの皮下に移植を行なった。移植10日後にマトリゲルを取り出し、顕微鏡下で観察したところ、Id1/Id3 shRNA発現ベクターを加えたマトリゲル内では有意に細胞の浸潤が抑えられ、血管の新生も抑えられていた。以上の結果より、VEGF誘導性の血管新生においてId遺伝子は重要な働きをしており、Id遺伝子の発現を押さえることにより、血管新生の阻害が可能であることが示された。

今年，今年是基于以下知识：从去年的结果中获得的ID基因的身份增强了血管内皮细胞，增加了育种和诱导血管新生儿代表关于抑制血管内皮激活的挑战，以及通过抑制ID的表达来抑制血管新生命的指导。使用RNA高表达向量，强行表达ID1和ID3特异性shRNA以抑制ID基因的表达。 VEGF处理是通过VEGF加工到人脐静脉状内皮细胞（HUVEC）的，这些细胞（HUVEC）被提前在ID表达抑制载体中转染，诱导新的血管，并诱导ID基因的表达。结果，与用阴性对照载体治疗的人相比，ID1/ID3基因的表达也未诱导，并且细胞增殖能力也被抑制，并且细胞增殖与VEGF非刺激相同。粘合分子的表达量也是激活的标记物，例如αV，α2，β1整合素，ICAM-1和E-固定蛋白，与未经处理的标记和表达相同，以及细胞游戏，MMP2的产生和管形成。像NOH这样的血管表达类型不能在VEGF刺激下引导。我们进行了体内矩阵测定法，目的是在体内验证实验结果。 Matrigel提前以VEGF100 ng/ml的浓度进行调节，并增加了ID1/ID3 SHRNA表达载体，由仙台病毒包膜和模拟矢量覆盖，并皮下移植B6小鼠。当移植后10天取出矩阵并在显微镜下观察时，在Matrigel中显着抑制了细胞，并在ID1/ID3 SHRNA表达载体中添加了细胞，并抑制了新的血管。从上面的结果中可以看出，ID基因在VEGF诱导的血管新生生中很重要，并且ID基因的表达可以被基因的表达抑制。