植物におけるストレス耐性に関与する遺伝子群の同定とその機能解析

植物抗逆相关基因的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
02J20110
负责人：
明石英雄
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

植物細胞においてリボザイム挙現系を構築したが,遺伝子発現抑制効果が得られなかった。哺乳動物細胞は37℃で培養するが,植物細胞は27℃で培養するため,反応速度が極めて遅くなることが原因であると考えられる。そこで,遺伝子発現を制御する方法として長い二重鎖RNA発現ベクターを用いたRNAi法を検討したところ,効果的にタバコ培養細胞における遺伝子発現が抑制され,Methods Mol. Biol.誌にその方法を発表した。哺乳動物細胞においてRNAiを用いたストレス耐性に関与する遺伝子の研究も同時に進めている。RNAiは非常に強力な遺伝子発現制御法として注目されている技術であるが,30塩基以上の長い二重鎖RNA(dsRNA)は細胞にストレスを与え,インターフェロン(IFN)応答に関わる遺伝子を誘導することが問題となっている。長いdsRNAによるRNAiは,例えば変異の入りやすいRNAウイルスなどに対して有効であると考えられる。特定の条件でdsRNAに変異を入れると,100塩基以上のdsRNAでもIFN応答を誘導せず,RNAi活性を全く落とさないことが分かった。この現象は,ヒト癌細胞だけでなく正常マウス細胞においても観察され,一般性が示された。実際にC型肝炎ウイルス(HCV)配列を標的として長いdsRNAベクターを導入すると,21塩基のsiRNAでは抑制できないような変異が入ったウイルスに対しても効果があることが示唆され,さらに21塩基のslRNA発現ベクターよりも早い時間でHCV増殖の抑制が観察された。これらの結果は,哺乳動物細胞で長いdsRNAを用いた場合にIFN応答を避けられる方法を示した初めての報告であり,その応用としてRNAウイルスに対する有効性をも示した。その結果をまとめた論文は,Mol. BloSystems誌に発表した。

在植物细胞中构建了核酶增强系统，但没有获得抑制基因表达的作用。在37°C培养哺乳动物细胞，而植物细胞在27°C下培养，这被认为是由于反应速率极慢。因此，我们使用长双链RNA表达载体作为控制基因表达的方法研究了RNAi方法，并有效地抑制了烟草培养的细胞中的基因表达，该方法在方法mol中发表。生物。我们还正在对使用RNAi在哺乳动物细胞中使用RNAI抗应激性的基因进行研究。 RNAi是一种吸引注意力作为控制基因表达的非常有力的方法的技术，但问题在于，具有30多个碱基的双链RNA（dsRNA）应胁迫细胞，并诱导与干扰素（IFN）反应有关的基因。具有长dsrNA的RNAi被认为对容易突变的RNA病毒有效。已经发现，当在某些条件下将突变放置在dsRNA中时，即使是100个碱基或更多碱基的DSRNA也不会诱导IFN响应，并且根本不会降低RNAi活性。这种现象不仅在人类癌细胞中，而且在正常小鼠细胞中观察到，表明普遍性。实际上，提示用丙型肝炎病毒（HCV）序列引入长的DSRNA载体作为一个靶标的有效，以防止因突变而被21个碱基的siRNA无法抑制的突变，并进一步抑制了HCV增殖的进一步抑制，而比Slrna表达载体早于21个基础的SlrNA表达载体。这些结果是第一个报告说明如何在哺乳动物细胞中使用长dsRNA时如何避免IFN响应，并且还证明了它们针对RNA病毒作为应用的疗效。总结结果的论文发表在mol中。 Blosystems。