胚中心における免疫記憶の誘導、維持に関与する分子機構の解明

阐明生发中心免疫记忆诱导和维持的分子机制

• 批准号: 02J20062
• 负责人: 錦見 昭彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute for Longevity Sciences,NCGG
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20062/
• 关键词: 胚中心; B細胞; 免疫記憶; シグナル伝達; Cdc42; GEF; DOCKファミリータンパク; PHドメイン; cDNAサブトラクション; in vitroキナーゼアッセイ

昨年度までに、胚中心の成熟B細胞において、それら以外のB細胞と比較して発現が増強している遺伝子群の中で、リン酸化シグナル伝達に関与している因子として、新規タンパクであるSPH238を単離した。このタンパクについて解析したところ、guanine nucleotide exchange factor (GEF)のひとつであるZizimin1と高い相同性をもち、かつ主要なドメイン構造も一致していることが明らかになった。また、アミノ酸配列や遺伝子がX染色体上に存在するといった状況から、Zizimin2(あるいはDOCK11)として存在が予測されていたタンパクであることが明らかになった。リコンビナントのRhoタンパクを用いたpull-downアッセイにより、Zizimin2はZizimin1と同様にC末端側のCZH2ドメインを介してCdc42に特異的に結合すること、また、Zizimin2をCOS1細胞に過剰発現させるとCdc42が活性化されることから、Zizimin2はCdc42に特異的なGEFであることが示された。Zizimin2について発現解析を行った結果、脾臓、胸腺、骨髄、末梢血リンパ球といった免疫系組織で特異的に発現していることが明らかになった。この結果は、胚、脳、腎臓で発現しているZizimin1とは対照的な結果である。このことからは、Zizimin2は免疫系特異的にCdc42を調節する因子であることが示唆された。これらの実験と並行して、Zizimin1をコンディショナルにターゲティングするベクターで相同組換えしたES細胞をマウス着床前胚に注入し、キメラマウスを作製した

截至去年，新蛋白SPH238已被鉴定为参与一组基因磷酸化信号转导的因子，与其他B细胞相比，其在生发中心成熟B细胞中的表达增强。对该蛋白的分析表明，它与鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）Zizimin1具有高度同源性，并且主要结构域结构也相同。此外，根据氨基酸序列和该基因位于X染色体上的事实，该蛋白质被预测为Zizimin2（或DOCK11）。使用重组 Rho 蛋白的 Pull-down 测定表明，与 Zizimin1 一样，Zizimin2 通过其 C 末端侧的 CZH2 结构域特异性结合 Cdc42，并且 COS1 细胞中 Zizimin2 的过表达会抑制 Cdc42。全球环境基金。 Zizimin2的表达分析表明，它在脾脏、胸腺、骨髓和外周血淋巴细胞等免疫系统组织中特异性表达。这一结果与 Zizimin1 形成对比，Zizimin1 在胚胎、大脑和肾脏中表达。这表明 Zizimin2 是以免疫系统特异性方式调节 Cdc42 的因子。与这些实验平行，我们通过将与有条件靶向 Zizimin1 的载体同源重组的 ES 细胞注射到小鼠植入前胚胎中，产生了嵌合小鼠。

项目成果

Expression of TARSH gene in MEFs senescence and its potential implication in human lung cancer.

TARSH 基因在 MEF 衰老中的表达及其在人类肺癌中的潜在意义。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochemical and Biophysics Research Communications (印刷中)
• 作者: Uekawa;N.;Terauchi;K.;Nishikimi;A.;Shimada;J.;Maruyama;M.
• 通讯作者: M.