胎生期脳に発現する性特異的遺伝子の解析

胚胎大脑中表达的性别特异性基因分析

基本信息

批准号：
13780638
负责人：
山口宜秀
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

脳には有意な構造上の性差が存在し、単純な性行動ばかりでなく高次機能にも関与していることが知られている。しかしながら、脳におけるこのような性差形成のメカニズムは未だ十分には理解されていない。ラットの性腺形成において性差が見られ始めるのは胎生12日からである。脳の基本構造形成が行われるのは胎生13日から20日の間である。昨年度に施行したエストロゲン受容体mRNAのin situ hybridization解析では、胎生18日、20日ラットで雌雄差があることが示唆された。本研究では、この胎生後期に焦点を当て、ラット雌雄胎仔脳で性特異的に発現している分子の同定による脳の性差形成機構の解明を目指している。本年度は、より機能に直結する蛋白質レベルにおいて、胎生後期脳の性差形成に関与する分子の検索を行った。脳発生のもっとも活発な胎生18日を中心に胎生16日、18日、20日のラットを用い、生後明確な性差が認められる視床と視床下部を一緒に、雌雄別に胎仔脳より分離し、試料を調製した。手法としては、1次元目を固定化pH勾配ゲルにより展開する2次元電気泳動法を用い、銀染色により雌雄間でのプロテオームを比較した。その結果、分子量50K〜60Kの間に性差を持って発現しているいくつかのスポットが検出された。これらは膜画分に存在し、いずれの時期においても性特異的に発現していた。また、胎生20日の大脳新皮質膜画分においても同様のスポットが検出された。これらのスポットは性差形成の過程に関与する受容体あるいは膜結合型の酵素などではないかと予想される。今後は性差が検出された蛋白質分子のスポットに関して、質量分析やアミノ酸解析等をもとにデーターベースで検索・同定するなど、さらに詳細な解析が必要である。

大脑存在明显的结构性别差异，众所周知，它不仅参与简单的性行为，而且参与了高阶功能。但是，这种性别差异在大脑中的机制仍未完全理解。从胚胎生命的第12天，在大鼠的性腺形成中，性别差异开始出现。大脑的基本结构发生在胚胎生命的第13天到20天之间。去年进行的雌激素受体mRNA的原位杂交分析表明，在胚胎生命的第18天和第20天，大鼠的雄性和女性存在差异。这项研究的重点是胎儿生命的后期，旨在通过鉴定在大鼠胎儿大脑中特定性别表达的性别的分子来阐明大脑中性别差异形成的机制。今年，我们在蛋白质水平上搜索了涉及晚期胚胎大脑中性别差异的分子，该分子与功能更直接相关。来自胎儿16、18和20的大鼠，具有最活跃的大脑发育，用于分离丘脑和下丘脑，那里通过性别，性别，胎儿大脑，性别和样本。作为一种方法，使用了使用固定的pH梯度凝胶开发第一维的二维电泳方法，并通过银色染色比较了男性和雌性之间的蛋白质组织。结果，检测到分子量为50k和60k的分子量之间的性别差异的几个斑点。这些存在于膜级分中，并且在任何时候都特定于性别。在胎儿寿命的20天，在新皮层膜的部分中也检测到了类似的斑点。预计这些斑点是与性差异形成过程有关的受体或膜结合的酶。将来，将需要更详细的分析，例如搜索和识别使用质谱和氨基酸分析数据库检测到性别差异的蛋白质分子的斑点。