コリプレッサーTuplとヒストンの相互作用とその転写抑制における役割

辅阻遏物 Tupl 与组蛋白的相互作用及其在转录抑制中的作用

基本信息

批准号：
13780557
负责人：
向由起夫
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780557/
关键词：
酵母転写抑制コリプレッサーヒストンクロマチン Tup1

项目摘要

出芽酵母のコリプレッサーTup1は,RNAポリメラーゼIIを含む転写装置と相互作用することにより,そしてクロマチン構造を変化させることにより,遺伝子の転写を抑制する。本研究では,Tup1がクロマチンを介して転写を抑制するメカニズムを明らかにするために,Tup1とヒストンタンパク質との相互作用が転写抑制に与える影響について検討した。713アミノ酸からなるTup1は73-328アミノ酸位の領域においてヒストンH3およびH4と結合する。次の方法によってTup1のヒストン結合領域をさらに詳しく解析した。(1)ヒストン結合領域内に導入した3種類の欠失変異はどれもtup1変異を相補することができなかった。従って,Tup1の機能には73-328アミノ酸領域が必要であると結論した。(2)Saccharomyces cerevisiae Tup1のヒストン結合領域をCandida albicans Tup1またはSchizosaccaromyces pombe Tup11のそれと置き換えたキメラ遺伝子を構築した。これらヒストン結合領域のアミノ酸配列がほとんど似ていないにもかかわらず,すべてのキメラ遺伝子がS.cerevisiae tup1変異を相補した。今後,これらのヒストン結合領域の高次構造を研究する必要があると考えられる。(3)S.cerevisiae TUP1遺伝子のヒストン結合領域内にPCR法によってランダム変異を導入し,それらから転写抑制能が欠損したtup1変異株を多数分離した。抗Tup1抗体を用いたウェスタンブロッティングを行うと,変異Tup1タンパク質のほとんどが不安定であったが,安定なTup1タンパク質を発現する3株を見つけることができた。これらの中にヒストンH3またはH4と結合できない変異株が含まれることが期待される。

发芽酵母的Corepressor TUP1通过与含有RNA聚合酶II的转录装置并改变染色质结构来抑制基因转录。在这项研究中，我们研究了TUP1与组蛋白的相互作用对转录抑制的影响，以阐明TUP1抑制转录抑制的机制。由713个氨基酸组成的TUP1在73-328氨基酸位置的区域结合组蛋白H3和H4。通过以下方法进一步分析了TUP1的组蛋白结合区域。（1）引入组蛋白结合区域的三种缺失突变中没有一个能够补充TUP1突变。因此，得出结论，TUP1功能需要73-328氨基酸区域。（2）构建了嵌合基因，其中酿酒酵母TUP1的组蛋白结合区域被白色念珠菌TUP1或schizosaccaromyces pombe tup11取代。尽管这些组蛋白结合区的氨基酸序列在很大程度上相似，但所有嵌合基因都补充了酿酒酵母TUP1突变。人们认为，将来有必要研究这些组蛋白结合区域的高阶结构。（3）通过PCR将随机突变引入酿酒酵母TUP1基因的组蛋白结合区域，并从中分离出许多具有不足转录抑制能力的TUP1突变体。使用抗TUP1抗体的蛋白质印迹显示，大多数突变体TUP1蛋白都是不稳定的，但是发现了三种表达稳定TUP1蛋白的菌株。预计这些将包括不能结合组蛋白H3或H4的突变体。