ラット耳下腺腺房細胞における末梢型ベンゾジアゼピン受容体の機能に関する解析-ミトコンドリアからのカルシウムイオン遊離におよぼす影響-

大鼠腮腺腺泡细胞外周苯二氮卓受体功能分析-对线粒体钙离子释放的影响-

• 批准号: 13771102
• 负责人: 大久保 みぎわ
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771102/
• 关键词: ベンゾジアゼピン類; カルシウムイオン; 口腔乾燥症; ミトコンドリア; 耳下腺; 唾液腺; Na^+; K^+; 2Cl^-共役輸送; クロライドイオン; Ca^<2+>依存性K^+チャネル; 2Cl-共役輸送体

これまでに本研究室において、耳下腺腺房細胞に中枢型と末梢型両ベンゾジアゼピン受容体が存在し水分泌を抑制すること、この抑制が細胞内のCl^-貯留に起因することを明確にした。細胞内へのCl^-貯留は基底膜側からのCl^-流入促進と管腔側からのCl^-流出抑制により引き起こされ、Cl^-流入の一経路としてNa^+/K^+/2Cl^-共役輸送系の関与が証明された。H13年度はこの経路を明らかにするために、基底膜からのCa^<2+>流入の関与について検索を行った。45Ca^<2+>の取り込み実験を行った結果、中枢型と末梢型両ベンゾジアゼピン受容体アコニストのジアゼパムおよび、末梢型ベンゾジアゼピン受容体アコニストのRo5-4864は適用直後1分以内では細胞内へのCa^<2+>流入を増加させたが、それ以降の取り込みには影響を及ぼさなかった。また、カルバコール刺激時のCa^<2+>流入をジアゼパムは抑制した。ベンゾジアゼピン類による基底膜付近の局所的なCa^<2+>濃度の上昇がCa^<2+>依存性K^+チャネルを介したNa^+/K^+/2Cl^-共役輸送系に関与していることを示した。本年度はFura2を用いた細胞内Ca^<2+>濃度変化の蛍光画像解析を行った。ベンゾジアゼピン類はカルバコール刺激時の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を抑制したがその一方、単独で適用したときは大きな変化が認められなかった。これらの結果から、ベンゾジアゼピン類はムスカリン刺激時には細胞内Ca^<2+>濃度の上昇を抑制するが、単独で適用したとき微量ではあるが細胞内へのCa^<2+>流入を促進することが示された。また、この流入は細胞全体のCa^<2+>濃度の上昇はせず、基底膜付近で起こる局所的なCa^<2+>濃度の上昇に関与していることが示唆された。

我们的实验室迄今为止已经证明腮腺腺泡细胞中存在中枢和外周苯二氮卓受体并抑制水的分泌，并且这种抑制是由细胞内Cl^-储存引起的。 Cl^-在细胞内的积累是由于促进Cl^-从基底膜侧流入并抑制Cl^-从管腔侧流出而引起的，以及Na^+/K^+/2Cl^-共轭转运的参与系统进行了演示。 2003年，为了阐明这一途径，我们寻找Ca^2+从基底膜流入的参与。 45Ca^2+摄取实验的结果是，中枢和外周苯二氮卓受体激动剂地西泮和外周苯二氮卓受体激动剂Ro5-4864不会将Ca^2+释放到细胞内。施用后1分钟^<2+>增加流入，但对随后的吸收没有影响。此外，地西泮在卡巴胆碱刺激期间抑制Ca 2+ 流入。苯二氮卓类药物引起的基底膜附近局部Ca^2+浓度的增加导致通过Ca^2+门控K^+通道的Na^+/K^+/2Cl^-缀合运输系统。他们参与其中。今年，我们使用Fura2对细胞内Ca^2+浓度的变化进行了荧光图像分析。苯二氮卓类药物抑制卡巴胆碱刺激后细胞内Ca 2+ 浓度的增加，但单独施用时未观察到重大变化。这些结果表明，苯二氮卓类药物抑制毒蕈碱刺激后细胞内Ca 2+ 浓度的增加，但当单独施用时，它们促进Ca 2+ 流入细胞，尽管是少量的。此外，表明这种流入并不增加整个细胞中的Ca 2+ 浓度，而是涉及发生在基底膜附近的Ca 2+ 浓度的局部增加。