GM-CSFによる遺伝子再構成に関わる遺伝子群のサブトラクション法による同定

扣除法鉴定参与 GM-CSF 基因重排的基因组

基本信息

批准号：
13218017
负责人：
佐藤宏
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218017/
关键词：
NKT細胞分化遺伝子再構成サブトラクション・クローニング

项目摘要

従来、リンパ球系列の細胞としては、T細胞、B細胞、NK細胞の3種類の存在が知られていたが、近年になって新たに第4のリンパ球系列の細胞群としてNKT細胞が同定された。この細胞は、自己免疫疾患の発症抑制や、強い抗腫瘍作用を有することから注目を集めているが、その分化経路・機序に関しては不明な点が多い。我々は、最近、NKT細胞の前駆細胞を同定し、この細胞においてGM-CSFレセプターを介したシグナルによってT細胞レセプターα鎖遺伝子再構成が高頻度に誘導されることを明らかにした。本申請課題では、このような遺伝子再構成、分化に関連する遺伝子群を単離し、NKT細胞分化機序の一端を明らかにすることを目的とした。NKT前駆細胞においてはGM-CSFレセプターを介したシグナルによってT細胞レセプターα鎖遺伝子再構成が高頻度に誘導され、成熟した細胞に分化する。この機構を明らかにすることを目的として、分化誘導に伴って発現レベルの変化する関連遺伝子の単離を行った。NKT前駆細胞をGM-CSFにより分化を誘導し(活性化前駆細胞)、分化誘導前NKT前駆細胞との間でサブトラクション・クローニング法を行った。また、活性化前駆細胞に特異的と考えられた数百個のクローンに関してさらにvirtual Northern法ならびにRT-PCR法によって特異性を再確認し、確認されたすべてのクローンをシークエンスした。その結果、この分化誘導に伴い24種類の既知遺伝子と、6種の新規遺伝子が分化に伴って発現レベルが上昇することを確認した。新規遺伝子に関しては、得られた配列情報に基づきRACE法を行い全長mRNA配列の決定を行った。今後主にNKT細胞の分化、機能等の観点から機能の解析を続行する計画である。そして、同定した遺伝子の機能を解析するために、ノックアウトマウスを作成中である。

通常，淋巴细胞谱系中的三种细胞已知：T细胞，B细胞和NK细胞，但近年来，NKT细胞已被新鉴定为第四个淋巴细胞谱系中的一组细胞。这些细胞引起人们的注意，因为它们抑制了自身免疫性疾病的发作并具有强烈的抗肿瘤作用，但是关于它们的分化途径和机制有许多未知数。我们最近确定了NKT细胞的祖细胞，并揭示了该细胞中GM-CSF受体介导的信号经常在T细胞受体α链基因重排中诱导。该应用的目的是分离与基因重排和分化有关的基因组，并阐明NKT细胞分化的一部分。在NKT祖细胞中，通过GM-CSF受体的信号经常诱导T细胞受体α-链基因重排，该基因重排将分化为成熟细胞。为了阐明这种机制，分离了具有不同表达水平的相关基因以及分化的诱导。通过GM-CSF（活化的祖细胞）诱导NKT祖细胞的分化，并在分化诱导之前在NKT祖细胞之间进行减法和克隆。此外，通过虚拟北部和RT-PCR方法进一步重新确认了数百个被认为是活化祖细胞的克隆，并将所有确认的克隆测序。结果，证实了24个已知基因和6种新基因的表达水平随分化诱导而增加。对于新基因，全长mRNA序列由基于获得的序列信息的种族方法确定。该公司计划主要从NKT细胞分化和功能的角度继续其功能分析。然后，正在创建敲除小鼠以分析鉴定基因的功能。