歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症における異常な蓄積蛋白のプロテオミクス

齿状核苍白球路易斯萎缩中异常积累蛋白质的蛋白质组学

基本信息

批准号：
13210145
负责人：
矢澤生
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Okinaka Memorial Institute for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症(DRPLA)は常染色体優性遺伝の神経変性疾患で、原因遺伝子のCAGの3塩基の繰り返し配列(CAG repeat)が異常に伸長するポリグルタミン病のひとつである。我々はDRPLA遺伝子産物(DRPLA蛋白)をヒト脳組織において同定し、DRPLA蛋白が脳神経細胞で集合して存在し、DRPLA患者脳組織のDRPLA蛋白は高分子蛋白複合体に多く取り込まれることを報告した。本研究では複数の抗DRPLA蛋白抗体を作成し、DRPLA脳組織のDRPLA蛋白の翻訳後修飾や異常プロセシングについて検討した。DRPLA脳組織を非還元条件で電気泳動後、イムノブロットを抗ユビキチン抗体で染色すると、高分子DRPLA蛋白複合体は抗ユビキチン抗体と免疫反応を認めた。免疫反応はDRPLA脳組織で神経変性が著しい部位で強い高分子複合体の病的ユビキチン化の傾向を認めた。DRPLA脳組織の非還元条件電気泳動後イムノブロットを抗phosphoserine抗体で染色すると、コントロール脳組織では認識されない高分子蛋白と免疫反応を示した。次に、DRPLA脳組織を非還元条件で電気泳動後、高分子蛋白のバンドを切り出し、切り出したバンドをalkaline phosphataseで酵素処理後に非還元条件で再電気泳動すると、DRPLA脳組織のイムノブロットで高分子DRPLA蛋白複合体の抗phosphoserine抗体に対する免疫反応が消失した。免疫組織染色でDRPLA患者脳を検討すると、抗phosphoserine抗体に対する免疫反応は主にDRPLA脳組織の神経細胞の核及び核内封入体に認められた。DRPLA蛋白を含む高分子蛋白複合体はDRPLA脳神経細胞核内で、異常リン酸化の翻訳後修飾を受けることが示された。

Globus pallidus pallidus louis萎缩症（DRPLA）是一种常染色体显性神经退行性疾病，并且是多谷氨酰胺疾病之一，其中一种病因基因的三个基本重复序列（CAG重复）异常伸长。我们鉴定了人脑组织中的Drpla基因产物（DRPLA蛋白），并报道Drpla蛋白在脑神经元的簇中发现了Drpla蛋白，并且与Drpla患者的脑组织中的Drpla蛋白在很大程度上被纳入了聚合物蛋白复合物中。在这项研究中，创建了多种抗DRPLA蛋白抗体，并研究了DRPLA脑组织中Drpla蛋白的翻译后修饰和异常加工。在非还原条件下Drpla脑组织的电泳后，用抗泛素抗体染色免疫印迹，聚合物DRPLA蛋白复合物显示出对抗泛素抗体的免疫反应。免疫反应显示出在Drpla脑组织中具有显着神经变性的部位的强聚合物复合物的病理泛素化趋势。用抗磷酸酯抗体对Drpla脑组织的免疫印迹显示出对对照脑组织未识别的聚合物蛋白的免疫反应。接下来，在非还原条件下Drpla脑组织的电泳后，切除了聚合物蛋白的带，并在酶磷酸酶处理酶处理后在非还原条件下重新载体，并通过抗磷酸抗磷酸抗磷酸抗磷脂的抗磷酸化蛋白的免疫反应来重新载体。当检查具有免疫组织化学染色的DRPLA患者的大脑时，主要在神经元的核和DRPLA脑组织的核内夹杂物中观察到对抗磷酸赛抗体的免疫反应。含有Drpla蛋白的聚合蛋白复合物显示出在Drpla脑神经元核内进行异常磷酸化的翻译后修饰。