細胞増殖抑制Tobファミリー蛋白質の発生工学を用いた機能解析

使用发育工程对细胞生长抑制 Tob 家族蛋白进行功能分析

• 批准号: 01J60026
• 负责人: 安島 理恵子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J60026/
• 关键词: 遺伝子欠損マウス; 転写調節; 細胞増殖; 骨形成

Tob、Tob2、BTG1、PC3、ANAで構成される新規ファミリー遺伝子産物は細胞増殖抑制をもち、細胞周期制御に重要な役割を持っていることが示唆されている。また、tob遺伝子欠損マウスは、加齢に伴う癌形成や、大理石骨病様の病態を示す。tob2遺伝子欠損による骨代謝への影響を調べる為、これまでに作製したtob/tob2 KOマウスを用い骨量解析を行った。その結果、tob遺伝子欠損マウスとは逆にtob/tob2 KOマウスでは、tob KOマウスとは反対に骨量が減少していた。また、tob2 KOマウスの骨髄を用いた分化誘導実験で、破骨細胞への分化の亢進が示された。今後、破骨細胞分化機構へのTob2の関わりについて解析を進めていく予定である。近年の解析により、Tobの増殖抑制活性の制御にはErk1/2によるTobのリン酸化が非常に重要な役割を果たしていることがわかってきた。このTobのErk1/2によるリン酸化部位は、Tob2において保存されている。そこで、血清もしくはPDGF刺激後のNIH3T3細胞の可溶化液を用い、Tob2のリン酸化についてウエスタンブロットにより解析したところ、刺激依存的にTob2のリン酸化による泳動度の変化が確認された。またこの泳動度の変化は細胞のMEKインヒビター(PD98059)処理により減弱することから、Tob2もTobと同様にErk1/2にリン酸化される可能性が示唆された。更に、Tob2がTobと同様にcyclin D1遺伝子の転写の抑制活性を持つか、cyclin D1遺伝子プロモーターのレポーターを用いて解析した。その結果、Tob2は発現量依存的にcyclin D1遺伝子プロモーターの転写活性を抑制することがわかった。

已经提出，由TOB，TOB2，BTG1，PC3和ANA组成的新型家庭基因产物抑制细胞生长，并在细胞周期调节中起重要作用。此外，缺乏TOB基因的小鼠表现出与年龄相关的癌症形成和骨病样病理。为了研究TOB2基因缺乏对骨代谢的影响，使用迄今为止生产的TOB/TOB2 KO小鼠进行了骨质量分析。结果，与TOB基因缺陷小鼠相比，在TOB/TOB2 KO小鼠中，与TOB KO小鼠相比，骨骼质量减少了。此外，使用TOB2 KO小鼠的骨髓诱导分化的实验显示出增加了破骨细胞的分化。将来，我们计划分析TOB2参与破骨细胞分化机制。最近的分析表明，ERK1/2对TOB的磷酸化在控制TOB的生长抑制活性中起着非常重要的作用。 ERK1/2的TOB的磷酸化位点在TOB2中保守。因此，当使用NIH3T3细胞的裂解物使用血清或PDGF的裂解物通过蛋白质印迹分析TOB2的磷酸化时，确认了由于TOB2磷酸化引起的迁移率的刺激依赖性变化。此外，通过用MEK抑制剂处理细胞（PD98059），这种迁移率的变化会减弱，这表明TOB2可以像TOB一样磷酸化至ERK1/2。此外，类似于TOB2的TOB，类似于TOB，具有细胞周期蛋白D1基因的转录抑制活性，或使用Cyclin D1基因启动子的报告基因进行分析。结果，发现TOB2以表达依赖性方式抑制了细胞周期蛋白D1启动子的转录活性。