高速液体混合技術を利用した蛋白質の折れ畳み初期過程の観察

利用高速液体混合技术观察蛋白质的初始折叠过程

基本信息

批准号：
01J03435
负责人：
秋山修志
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1、シトクロムcと呼ばれる球状小蛋白質は、変性状態から2つの中間体を経由して天然状態へと折れ畳む(天然状態→中間体1→中間体2→天然状態)。この折れ畳み過程において、二次構造が形成され分子半径が収縮していくダイナミクスを、独自に開発した高速液体混合装置を用いて研究した。得られた成果は以下の通りである。(1)二次構造の形成部位を同定するために、高速パルスラベルNMR測定を行うための多段階混合系の構築を独自に行った。測定の結果、中間体2ではN末端、C末端、60'sと呼ばれる3つのヘリックスが形成されていることを明らかとした。この成果は、紀要としてまとめられている(Stepwise Folding Mechanisms of Globular Proteins)。(2)分子の形状を調べるために、SPring-8でX線小角散乱による測定を行った。中間体1と中間体2の慣性半径は、各々20.5と17.7Åと見積もられた。中間体1の構造がコンパクトに凝縮した部位と、大きく変性している部位から構成されるに対し、中間体2の形は極めて球状に近いことが明らかとなった。また、慣性半径や分子の形の類似性から、中間体2がモルテン・グロビュール状態であることを提唱した。この成果は、論文にまとめられている(PNAS)。2、アポミオグロビンの折れ畳み運動アポミオグロビンの折れ畳み過程を研究した結果、分子の大きさ・形の似た中間体が少なくとも3つ存在することが示唆された。折れ畳み初期に形成される中間体は、およそ200マイクロ秒程度の時定数で消失する短寿命状態で、X線小角散乱法やCD分光法と高速混合型フローセルを組み合わせた研究により始めてその存在が明らかとなった。3、ポリグルタミン酸(PGA)のヘリックス形成過程CD分光法や赤外分光法に高速混合型フローセルを組み合わせた装置を用い、pHジャンプに伴うPGAのヘリックス形成過程を観察した。その結果、サブミリ秒のタイムスケールでは、PGA一分子中に幾つかの折れ畳み核が作られることが明らかとなった(JACS)。

1。通过两个中间体（自然状态→中间体1→中间体2→自然状态），称为柠檬色C的球形小蛋白从变性状态到自然状态。在这种折叠过程中，使用独特的高速液体混合器研究了一种动力学，其中形成了二级结构并收缩分子半径。获得的结果如下。（1）为了识别二级结构的形成位点，对高速脉冲标签NMR测量进行了多阶段混合系统。测量结果，中间2显示，形成了三个称为N末端，C末端和60架的螺旋。该结果总结为小时候（球状蛋白的逐步折叠机理）。（2）为了检查分子的形状，通过X射线散射通过弹簧8进行测量。中间体1和中间体2的惯性半径估计为20.5和17.7Å。据揭示，中间2形状非常接近球形，而中间1结构被紧凑凝结，该部分大大恶化。他还主张，由于惯性半径的相似性和分子分子的形状，中间2位于Morten球状态。该结果总结在论文（PNA）中。 2。研究apomioglobin折断运动apomioglobin的折叠过程表明，至少有三个中间体在分子的大小和形状中。在折叠的早期形成的中间体是大约200微秒的短寿命状态，该状态在固定数字中丢失，并以X射线正方形散射方法，CD光谱和高速混合而开始Florus。 3。观察到聚谷氨酸（PGA）的螺旋形成过程和将高速混合浮池与高速混合混合型流动池与红外光谱型结合的设备。结果，很明显，在PGA One分子（JACS）中制作了一些损坏的尺度。