ヒト人工染色体を用いた染色体機能の解析

使用人类人工染色体分析染色体功能

• 批准号: 01J01065
• 负责人: 中島 大
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J01065/
• 关键词: ヒト人工染色体; セントロメア; ヘテロクロマチン; 人工染色体; 独立したクロマチン構造; プロモーター; 安定した遺伝子発現; 転写

ヒト人工染色体の形成にはセントロメア機能の獲得が必要であることは必須だが、エピジェネティックの影響を受けているため、他にどのような要因によって決定されているか明らかにする必要がある。アルフォイドDNA断片をBACへクローン化しヒト培養細胞へ導入すると、宿主染色体とは独立して分配維持されるヒト人工染色体が形成される。さらに、TSA処理や薬剤選択圧をかけ続けることなどクロマチン構造をゆるめることで不活性化されていたアルフォイド配列上にセントロメア構成タンパクが再集合する現象がみられる。このことから、アルフォイド両側に予め転写領域を持たせることでより効率よく人工染色体形成を調べたが、全く形成はみられず従来の片側に薬剤耐性遺伝子を入れたBACでしか形成しなかった。RNA合成がアルフォイド側までに及びセントロメア構成タンパクの集合が阻害された可能性もあったが、人工染色体上に存在するアルフォイド上までRNA合成の伸長がみられたことや、セントロメア構成タンパクの集合がホスト染色体へ挿入している部位にみられたことから、RNA合成伸長反応による影響ではなかった。一方、ヘテロクロマチン領域に存在するHP1の局在がM期人工染色体上にみられた。また、クロマチン免疫沈降法により、転写の行われていないBAC配列上にHP1が濃縮さており、転写領域やアルフォイド上には存在していないことが明らかになった。反対に、アセチル化ヒストンH3の局在は転写領域で高くアルフォイドや他のBAC上では低く、またセントロメア構成タンパクはアルフォイド上で高い濃縮がみられ他領域では低かった。以上の結果から、従来明らかになった新規に染色体を形成させるにはセントロメア構造を作られるだけでは不十分でコヒージョン等の機能に必要なヘテロクロマチン領域も同時に形成させる必要があるということを強く示唆する結果が得られた。

必须形成人造染色体的形成需要获得丝粒功能，但是由于表观遗传学的影响，有必要确定其他因素。当将αIDDNA片段克隆到BAC中并引入人类培养细胞时，形成了独立于宿主染色体的人造染色体。此外，存在一种现象，其中丝粒构型蛋白在AlphoeID序列中团聚，该序列通过松动染色质结构（例如继续TSA加工和药物选择压力）而被灭活。因此，我们通过预先在字母的两侧具有转录区域的转录区域来更有效地检查了人造染色体的形成，但仅在常规侧的一侧用含有药物抗药性基因的BAC形成。尽管RNA的合成可能阻碍了丝粒构型蛋白到字母侧，但RNA的合成延伸至人工染色体上的alfoid，并且一组丝粒组成蛋白没有发现RNA合成反应。在插入宿主染色体的部分中。另一方面，位于异染色质区域的HP1在M-末期人工染色体上发现。此外，很明显，染色质免疫沉积法集中在未进行转移的BAC序列上，并且它在转移区域或αEDID中不存在。相反，乙酰化H3的当地人在转录区域较高，在藻类和其他BAC上低，并且丝粒构型蛋白在α中很高，而在其他区域则较低。基于上述结果，很强的是，不足以创建一个不足以形成新揭示的染色体的丝粒结构，并且有必要形成同一功能所需的异染色质区域，例如同时进行。提出了建议。