アラビドプシス花序で発現するcDNAの系統的解析

拟南芥花序中表达的 cDNA 的系统分析

基本信息

批准号：
12024216
负责人：
河内孝之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12024216/
关键词：
シロイヌナズナアラビドプシス茎頂分裂組織遺伝子発現

项目摘要

我々はアラビドプシス花序茎頂で発現する遺伝子に注目して系統的な機能解析を進めてることにより、分裂組織での遺伝子による細胞の増殖分化の制御ネットワークを理解することを目指している。これまでに、アラビドプシスの花序分裂組織を含む茎頂組織から調製した均一化cDNAライブラリーを使用したディファレンシャルハイブリダーゼーションにより発現する遺伝子を発現の特異性と発現レベルに基づいて分類した。低い発現レベルでかつ茎頂特異的に発現すると期待されている遺伝子については、ゲノム解析の進行に伴い、様々な生物種の機能未知遺伝子と相同性を示すことが極めて多くなったが、機能予測が困難なものであった。このことから実験による実証的な機能解析が重要であることが改めて認識された。そこで、発現パターン解析が重要と考え、cDNAマイクロアレイを検討した。スライドグラスに約1200スポットを固定したテストアレイと6000のクローンを固定した高密度アレイを作成した。また、テストアレイを用いて、組織特異性およびストレス誘導性遺伝子を探索した結果、既知の遺伝子に加え、機能未知の遺伝子の発現変動を同定できた。RNAを単離する条件を更に詳細に設定することにより、生長の全体像を描く遺伝子発現プロフィーリングを更に進めている。一方、系統的突然変異体の選抜のために、遺伝子破壊系統のスクリーニングし、破壊系統を同定した。現在、順次機能解析を進めている。

我们的目标是通过针对拟南芥花序茎尖表达的基因进行系统功能分析，了解分生组织中基因对细胞增殖和分化的调控网络。迄今为止，我们已经使用从拟南芥茎尖组织（包括花序分生组织）制备的均质cDNA文库，通过差异杂交，根据表达特异性和表达水平对表达基因进行了分类。随着基因组分析的进展，预期以低表达水平并以茎尖特异性方式表达的基因越来越多地显示出与不同物种中未知功能的基因的同源性；这重申了通过实验进行经验泛函分析的重要性。因此，考虑到表达模式分析的重要性，我们研究了 cDNA 微阵列。创建了载玻片上固定有约 1200 个点的测试阵列和固定有 6000 个克隆的高密度阵列。此外，通过使用测试阵列搜索组织特异性和应激诱导的基因，我们能够识别除了已知基因之外具有未知功能的基因的表达变化。通过更详细地设置 RNA 分离条件，我们正在进一步推进描绘生长整体情况的基因表达谱分析。另一方面，为了系统地选择突变体，筛选基因破坏的品系并鉴定破坏的品系。目前，我们正在进行序贯功能分析。