標的指向性を付与したウイルス様超分子集合体によるアンチセンスDNAターゲティング

使用具有靶向性的病毒样超分子组装体进行反义 DNA 靶向

基本信息

批准号：
12019212
负责人：
原田敦史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)標的指向性分子を導入可能な末端官能基を有するブロック共重合体への標的指向性分子の導入:昨年度合成法を確立したPEG末端に反応性可能基(アルデヒド基)を有するアルデヒド-PEG-ポリジメチルアミノエチルメタクリレートブロック共重合体へのラクトース誘導体の導入を検討した。このブロック共重合体末端のアルデヒド基とp-aminophenyl-β,D-lactopyranosideを還元アミノ化反応させることによって、末端アルデヒド基に標的指向性分子としてラクトース誘導体を共有結合を介して導入することに成功した。(2)標的指向性基を表層に提示したポリイオンコンプレックス(PIC)ミセルの調製とその遺伝子発現効率:(1)項でラクトースを導入したブロック共重合体を用い、プラスミドDNA(pGL3-Luc)と水溶液中で混合することによりPICミセルが調製された。この溶液について動的光散乱測定を行った結果、混合比を最適化することにより、100nm程度のPICミセルが形成されていることが確認された。このラクトース導入の効果を評価するために、レセプターが発現しているHep G2細胞での遺伝子発現効率を評価した。比較としてレセプターが存在しないマンノースを表層に提示したPICミセルについても評価を行った。ミセルに内包することによりDNAの安定性が向上するためにフリーのプラスミドDNAより著しく高い遺伝子発現効率を示すことが確認された。さらに、表層の分子(ラクトースとマンノース)の違いを比較するとラクトース導入PICミセルの方が高い遺伝子発現効率を示したことから、本研究において目的とした標的指向性を有するDNAベクターがPICミセルシステムを利用することにより構築可能であることが示唆された。

(1)将靶向分子引入到具有可引入靶向分子的末端官能团的嵌段共聚物中：在PEG末端具有反应基团(醛基)的醛，去年建立了其合成方法。我们研究了将乳糖衍生物引入PEG-聚二甲氨基乙基甲基丙烯酸酯嵌段共聚物中。通过该嵌段共聚物末端的醛基与对氨基苯基-β,D-吡喃乳糖苷之间进行还原胺化反应，我们成功地通过共价键将乳糖衍生物作为目标分子引入到末端醛基中。做过。 (2)表面显示靶向基团的聚离子复合物(PIC)胶束的制备及其基因表达效率：使用(1)中引入乳糖的嵌段共聚物，通过以下方法制备质粒DNA(pGL3-Luc)和PIC胶束在水溶液中混合。对该溶液进行动态光散射测定，结果确认，通过优化混合比，形成了约100nm的PIC胶束。为了评估引入乳糖的效果，我们评估了表达受体的 Hep G2 细胞中的基因表达效率。为了进行比较，我们还评估了表面层存在不具有受体的甘露糖的 PIC 胶束。经证实，封装在胶束中可提高 DNA 的稳定性，从而导致比游离质粒 DNA 显着更高的基因表达效率。此外，当比较表面层分子（乳糖和甘露糖）的差异时，引入乳糖的PIC胶束显示出更高的基因表达效率，因此，在本研究中，具有靶向性的DNA载体能够使用PIC胶束系统。建议它可以通过使用来构建