遺伝子導入によるグリオーマ糖脂質抗原の細胞接着、浸潤における機能的解析

基因转移胶质瘤糖脂抗原在细胞粘附和侵袭中的功能分析

• 批准号: 11671374
• 负责人: 八巻 稔明
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11671374/
• 关键词: グリオーマ; ガングリオシド; 遺伝子導入; 浸潤; 接着; GM3ガングリオシド; GD3ガングリオシド; シアル酸転移酵素

細胞表面に発現されている糖脂質糖鎖が神経膠腫の生物学的特性、特に増殖、接着、浸潤に何らかの関わりを持つことを明らかにする目的で実験を行った。ラットグリオーマ細胞株RG2はその糖脂質成分がほぼGM3ガングリオシドからなる単純な組成を示している。糖脂質合成抑制剤D-PBPPを作用させるとRG2細胞はMatrigel invasion chamberにて浸潤能の亢進を示す。これに外来性のGM3を投与して糖脂質発現を正常化させると浸潤能の変化も元の状態に回復した。これによりGM3が浸潤に抑制的に機能していることが示唆された。さらに糖鎖抗原の発現を変化させることにより細胞の接着、浸潤との関わりを検証すべく糖鎖改変のためのシアル酸転移酵素遺伝子を導入し、GD3ガングリオシドに改変したクローンをした。平成11年度の実験では細胞の形態、増殖能、細胞間基質(collagen type I,IV,laminin,fibronectin)に対する接着性、Matrigel invasion chamberにおける浸潤能のいずれのアッセイにおいてもRG2 wild typeとRG2-GD3クローンの生物学的な機能に変化は認められなかった。平成12年度はGD3発現量の異なる3クローン(FACS解析ではGD3 26%、65%,100%陽性)を用いて同様の実験を行った。本年度の実験でも細胞の形態、増殖、接着、浸潤いずれのアッセイにおいても有意な変化を認めることはできなかった。以上の結果からRG2細胞においてはGM3にシアル酸を転嫁させたGD3に糖鎖構造を改変しても生物学的な機能には大きな変化は現われないものと結論された。

进行了该实验以澄清在细胞表面表达的糖脂甘氨酸与神经胶质瘤的生物学特性有关，尤其是增殖，粘附和侵袭。大鼠神经胶质瘤细胞系RG2表现出一种简单的组成，其中其糖脂成分大约由GM3神经节苷脂组成。当激活糖脂合成抑制剂D-PBPP时，RG2细胞在母质浸润室中表现出增加的浸润能力。当对此施用外源性GM3时，将糖脂表达归一化，并且侵入能力的变化恢复为原始状态。这表明GM3的侵入性抑制作用。此外，通过改变聚糖抗原的表达，引入了用于聚糖修饰的唾液酸转移酶基因，以验证与细胞粘附和侵袭的关系，并将克隆修饰为GD3神经节。在1999年的实验中，在RG2野生型的生物学功能和RG2-GD3克隆的生物学功能中，在细胞形态，增殖能力，对细胞间底物的粘附（IV型，IV，层粘连蛋白，纤维蛋白，纤维蛋白）或在基质中的侵袭能力的生物学功能中都没有观察到变化。在2000年，使用三个具有不同表达水平的克隆（在FACS分析中为26％，65％和100％阳性）进行了类似的实验。在今年的实验中，在任何细胞形态，增殖，粘附或侵袭的测定中未观察到任何重大变化。从以上结果得出结论，将聚糖结构转移到已转移到GM3的GD3上不会显示RG2细胞中生物学功能的任何重大变化。