上皮細胞の細胞接着と細胞極性のシグナリングの分子機構

上皮细胞细胞粘附和细胞极性信号传导的分子机制

• 批准号: 00J61102
• 负责人: 杉山 由樹
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J61102/
• 关键词: PKC; 細胞極性; 初期胚発生; 線虫; 非対称分裂; プロテアソーム; RNAi

aPKCの線虫ホモログPKC-3の結合タンパクとして同定したプロテアソームサブユニットRPN-2は、そのRNAi胚の分裂軸方向の異常がpkc-3 (RNAi)胚と類似することから、PKC-3と同様に、細胞極性形成と引き続く非対称分裂を制御していることが考えられた。今年度の極性タンパクの局在(PKC-3も含む)の解析からrpn-2(RNAi)胚では、これまでに知られている極性の喪失とは異なり、本来極性化せず等分裂するべき細胞に異常な極性化を引き起こし、分裂も非対称になっていることが明らかとなた。一方、本来非対称分裂する細胞には顕著な異常は見いだされなかった。同様の表現型は、プロテアソームの他のサブユニットでも見られることを明らかにし、RPN-2単独なものではなく、プロテアソームの表現型であることが示唆された。他方、細胞分裂期の進行に、プロテアソームと同じ経路で働くanaphase promoting complexの発現喪失胚の表現型とは異なることを確認し、分裂期の進行異常に付随する二次的な表現型ではなく、プロテアソームの機能喪失によって直接引き起こされる異常であると考えられた。以上の、プロテアソームの発現喪失は異所的な細胞極性化および非対称分裂を引き起こすという結果から、野生型胚には細胞の等分裂を制御する機構が存在するという、これまでに注目されたことのなかった機構があることを示し、その経路にプロテアソームが関与していることを明らかにした。他方、RPN-2特異的抗体の作製に成功し、内在性タンパクは細胞質、分裂期の核周辺、そして細胞膜に局在していることを明らかにした。このうち細胞膜の局在はPKC-3の既知の局在と一致するので、この部分において共局在する可能性が示唆された。

蛋白酶体亚基RPN-2被鉴定为APKC的线虫同源物PKC-3的结合蛋白，与PKC-3（RNAi）胚胎的结合蛋白相似，并且它被认为与PKC-3一样，它像PKC-3一样调节细胞极性形成和随后的不对称分裂。今年对极性蛋白定位（包括PKC-3）的分析表明，与先前已知的极性丧失不同，在RPN-2（RNAi）胚胎中，异常极化发生在细胞中，不应偏振，应平均分裂，导致脱节分裂，并且该分裂也是不对称的。另一方面，在自然不对称分裂的细胞中未发现明显的异常。在蛋白酶体的其他亚基中发现了类似的表型，这表明它是蛋白酶体表型，而不是单独的RPN-2。另一方面，我们证实了细胞分裂阶段的进展与胚胎的表型不同，后者失去了促进与蛋白酶体相同途径的后期促进复合物的表达，并且被认为是由蛋白酶体功能丧失而不是蛋白酶体功能丧失引起的，而不是与蛋白酶体的功能丧失引起的，而不是与MITOSITOTIOT OF MITOTOR的二级表型相关。以上结果表明，蛋白酶体表达的丧失会导致异位细胞极化和不对称分裂，表明有一种机制尚未注意到，其中野生型胚胎具有调节细胞平等分裂的机制，并且蛋白酶体与这一途径有关。另一方面，我们成功地产生了RPN-2特异性抗体，表明内源性蛋白质位于细胞质中，围绕有丝分裂相和细胞膜。其中，细胞膜的定位与PKC-3的已知定位相吻合，这表明它可以在该区域共定位。