PKNファミリーの細胞内伝達機構における機能解析

PKN家族细胞内传递机制的功能分析

• 批准号: 11680633
• 负责人: 向井 秀幸
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11680633/
• 关键词: PKN beta; PKN family; small GTPase Rho; sensitivity to arachidonic acid; SH3 protein; polyproline sequence; PRK2; Golgi

これまで蛋白リン酸化酵素PKNファミリーのメンバーとして、各組織に普遍的に存在するPKNαとPRK2の二つのアイソフォームの存在が明らかになっていたが、申請者らは、本年度の研究により、PKNの新たなアイソフォームを同定しPKNβと名づけた。PKNβは、PKNαやPRK2と同様、低分子量GTP結合蛋白質Rhoとの結合性を有していたが、さらにその制御領域内に、SH3蛋白質の結合コンセンサス配列を含むプロリンの豊富なストレッチを有しており、増殖因子受容体の下流で、Rhoとは異なるシグナルも同時に受けている可能性が考えられた。ノーザーンブロットおよび免疫化学的解析から、PKNβは、正常組織にはほとんど発現が認められず、腹瘍細胞系列において有意な発現を認めることがわかった。また、PKNβは、PKNαと異なって種々の腫瘍細胞系列において、核あるいは核周囲のゴルジ体に局在することも明らかになった。酵素学的解析から、PKNβは他のPKNファミリーのメンバー同様、自己リン酸化活性およびPKCと比較的似た基質特異性を示したが、しかしながら不飽和脂肪酸に対する反応性が他のメンバーに比べて乏しかった。これらの事実は、PKNファミリーの多様性を示すものであり、今後PKNβの生理機能に関する研究をすすめることにより、種々の増殖因子シグナルのクロストークや、転写制御、癌化のメカニズムの解明に寄与する可能性もあると考えられた。これらのデータは、Biochem.Biophys.Res.Commun.261,808-814,(1999)に報告した。

到目前为止，已经揭示了在每个组织中普遍存在的两个同工型PKNα和PRK2作为PKN家族成员的存在。但是，申请人在今年的研究中确定了PKN的一种新的同工型，并将其命名为PKNβ。像PKNα和PRK2一样，PKNβ与低分子量GTP结合蛋白RHO具有结合特性，但它也具有富含脯氨酸的拉伸，其中包含其对照区域内SH3蛋白的结合共识序列，并且有人认为它也可以接收与Rho，Rho，rho，生长因子受体受体不同的信号。北印迹和免疫化学分析表明，PKNβ在正常组织中几乎不表达，并且在心室细胞谱系中得到了显着表达。还表明，与PKNα不同，PKNβ在各种肿瘤细胞系中定位于细胞核或核周高尔基。酶促分析表明，与PKN家族的其他成员一样，PKNβ表现出自磷酸化活性和底物特异性，与PKC相对相似，但对不饱和脂肪酸的反应性较小。这些事实证明了PKN家族的多样性，人们认为，通过对PKNβ的生理功能的进一步研究，它也可以有助于阐明各种生长因子信号，转录调节和癌症发展的串扰机制。这些数据被报告为Biochem.biophys.Res.Commun.261,808-814，（1999）。

项目成果

Oishi,K.: "Identification and characterization of PKN β、a novel isoform of protein kinase PKN."Biochem.Biophys.Res.Comm.. 261. 808-814 (1999)

Oishi, K.：“PKN β 的鉴定和表征，PKN 是蛋白激酶 PKN 的一种新型亚型。”Biochem.Biophys.Res.Comm.. 261. 808-814 (1999)

Shibata、H.: "Interaction of PKN with a neuron-specfifc basic helix-loop-helix transcription factor、NDRF/NeuroD2."Mol.Brain Res.. 74. 126-134 (1999)

Shibata, H.：“PKN 与神经元特异性碱性螺旋-环-螺旋转录因子 NDRF/NeuroD2 的相互作用。Mol.Brain Res.. 74. 126-134 (1999)

Yoshinaga,C: "Mutational Analysis of the Regulatory Mechanism of PKN:The Regulatory Region of PKN Contains an Arachidonic Acid-Sensitive Autoinhibitory Domain"J.Biochem.. 126. 475-484 (1999)

Yoshinaga,C：“PKN 调节机制的突变分析：PKN 的调节区域包含花生四烯酸敏感的自抑制结构域”J.Biochem.. 126. 475-484 (1999)