正常口腔細菌叢移行のための植物抗体生産系の確立

正常口腔菌群转移植物抗体生产系统的建立

基本信息

批准号：
11877365
负责人：
花田信弘
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877365/
关键词：
ミュータンスレンサ球菌リコンビナント抗体受動免疫法

项目摘要

日本人の多くは、齲蝕症の病原菌であるミュータンスレンサ球菌に感染している。我々は、ミュータンスレンサ球菌のみを特異的に除菌し、口腔細菌叢をより望ましいものに移行させることを計画している。選択的除菌法として我々は受動免疫法を採用しようとしている。受動免疫法には大量の抗体が必要であり、現在普及している動物細胞を用いた生産法ではコストがかかりすぎ、現実的な方法ではないと考えられてきた。我々は、遺伝子組換え技術を用いて抗体を大量に産生する植物を開発することで、受動免疫法による除菌の実現を計画している。これまでに、国立感染症研究所口腔科学部においてミュータンスレンサ球菌の歯面接着因子を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。いくつかの抗体はミュータンスレンサ球菌の歯面への付着を阻害する活性を持つことが予測され、現在、抗体を用いた除菌の臨床研究を進めている。平成11年度は、これらの抗体を植物に産生させるために、抗体をコードするcDNAをクローニングし、活性の強いリコンビナント抗体のクローンをスクリーニングした。モノクローナル抗体K2F、K4A、S2Cそれぞれを産生するハイブリドーマからmRNAを抽出し、RT-法によってFabのL鎖とH鎖それぞれをコードするcDNA断片を得た。各断片はベクター(pFab1-His2)にクローニングし、大腸菌JM109株を用いFabとして発現させた。各モノクローナル抗体につき約40コロニーをELISAによってスクリーニングし、強い活性を持つクローンを、それぞれ1〜0mlスケールで培養し可溶性タンパク質を抽出、そこからヒスチジンタグを用いてFabの粗精製物を得た。これらの結果は第3回日本ワクチン学会学術集会、及び第22回日本分子生物学会年会において発表した。今後、各リコンビナント抗体をコードするcDNAをタバコ、イネに導入し、抗ミュータンスレンサ球菌抗体を産生する植物を作製する予定である。

许多日本人感染了一种仇恨病原体的毒虫链球菌。我们计划仅特别对诱变链球菌进行消毒，然后将口服菌群转移到更理想的菌群中。我们试图采用被动免疫作为选择性灭菌方法。被动免疫需要大量的抗体，目前使用动物细胞的流行生产方法太昂贵，被认为不是现实的方法。我们计划通过使用被动免疫来开发使用遗传重组技术产生大量抗体的植物来实现消毒。到目前为止，已经产生了单克隆抗体，该抗体已专门识别肌肉链球菌的牙齿粘附因子。预计几种抗体具有活性，可以抑制Mutan链球菌对牙齿表面的粘附，并且目前正在使用抗体进行抗菌作用。 1999年，为了在植物中产生这些抗体，将编码抗体的cDNA克隆，并筛选出高度活性重组抗体的克隆。从产生单克隆抗体K2F，K4A和S2C的杂交瘤中提取mRNA，并通过RT方法获得编码FAB的L和H链的cDNA片段。将每个片段克隆到载体中（PFAB1-HIS2），并使用大肠杆菌菌株JM109表示为FAB。每种单克隆抗体通过ELISA筛选了大约40个菌落，并以1-0 mL的比例培养了高度活性的克隆，以提取可溶性蛋白质，从中使用组氨酸标签从中纯化了粗晶革。这些结果是在日本疫苗协会的第三届学术会议上以及日本分子生物学学会的第22届年会上提出的。将来，编码每种重组抗体的cDNA将被引入烟草和水稻中，以产生产生抗乳球菌链球菌抗体的植物。