ヘパラネースによる細胞外マトリックス分解能の口腔癌転移予測診断への応用

乙酰肝素酶细胞外基质解析在口腔癌转移预测诊断中的应用

基本信息

批准号：
11877346
负责人：
榎本昭二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度においては、昨年発表されたヘパラネース遺伝子のシークエンスをもとに、培養口腔癌細胞株および、患者から得られた口腔癌組織内におけるヘパラネースの発現について検索を行い、その転移能との相関についても調べた。さらに、研究計画どおり、培養扁平上皮癌細胞株におけるヘパラナーゼの活性とMMP2、9、MT-MMPの発現との相関も調べた。用いた培養細胞それぞれのヘパラネースmRNAの発現量は、活性レベルとほぼ相関していることがわかった。ヘパラナーゼの酵素活性を、定量PCR法を用いて、簡便に測定できることが示唆された。術前からリンパ節転移が存在した症例、原発が制御されても術後9ヶ月以内にリンパ節転移を確認した症例のなかでヘパラナーゼ陽性例数を見ると、前者には57.1%で陽性、また、後者では、100%陽性であった。また、発現レベルとともに転移率の上昇が見られた。以上より、ヘパラネースが、口腔癌において、リンパ節転移能と関連する重要なマーカーの1つになる可能性が期待できる。さらに、培養扁平上皮癌細胞株における、MMP2,MMP9,MT1-MMP,TIMP2の発現を定量し、そのヘパラネース活性とマトリジェルにおける浸潤能の相関についてしらべたところ、それぞれの細胞の浸潤能に対し、独立したMMPの発現レベルとヘパラネース活性を有しており、とくに大きな相関は見出されなかった。現在、昨年クローニングしたラットヘパラネースの抗体の精製を完了させ、また、in situハイブリダイゼーション法による、組織内のヘパラネース発現パターンを検索しており、マウス実験転移モデルと組み合わせて、がん転移機構における、ヘパラネースの機能の分析を続けていく予定である。

今年，我们根据去年发表的乙酰肝素酶基因序列，在培养的口腔癌细胞系和从患者身上获得的口腔癌组织中寻找乙酰肝素酶的表达，并研究了其与转移潜力的相关性。此外，根据研究计划，我们还研究了培养的鳞状细胞癌细胞系中乙酰肝素酶活性与MMP2、9和MT-MMP表达的相关性。发现所使用的每种培养细胞中乙酰肝素酶mRNA的表达水平几乎与活性水平相关。这表明使用定量PCR方法可以很容易地测量乙酰肝素酶的酶活性。从术前有淋巴结转移的病例和原发肿瘤控制后9个月内确诊淋巴结转移的病例中，乙酰肝素酶阳性的病例数来看，前者为57.1%；后者100%呈阳性。此外，观察到表达水平增加了转移率。综上所述，预计乙酰肝素酶可能成为与口腔癌淋巴结转移潜力相关的重要标志物之一。此外，我们定量了培养的鳞状细胞癌细胞系中MMP2、MMP9、MT1-MMP和TIMP2的表达，并研究了它们在Matrigel中的乙酰肝素酶活性和侵袭能力之间的相关性。发现了很大的相关性。目前，我们已经完成了去年克隆的大鼠乙酰肝素酶抗体的纯化，并正在通过原位杂交寻找组织中乙酰肝素酶的表达模式，我们计划继续分析乙酰肝素酶的功能。