フォトアフィニティーラベル法を用いた耐性克服薬剤の検索と耐性機構の解析

使用光亲和标记寻找克服耐药性的药物并分析耐药机制

基本信息

批准号：
62015070
负责人：
秋山伸一
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62015070/
关键词：
多剤耐性耐性克服フォトアフィニティーラベル法

项目摘要

1.多剤耐性克服薬剤のスクリーニングと構造活性相関ジヒドロピリジン誘導体24種類の多剤耐性克服活性を調べた. そのうちの13は多剤耐性変異株KBーC_1の抗がん剤耐性を完全に克服した. 9種は部分的に耐性を克服し, 2種は耐性克服活性を有しなかった. 耐性を完全に克服するグループはビンブラスチンのフォトアフィニティー誘導体,^<125>IーNASVによるPー糖蛋白質のフォトラベルを低濃度で阻害したが, 耐性克服活性を有しないグループはフォトラベルを阻害しないことが判明した. 構造と耐性克服活性についての検索により疎水性の強い誘導体ほど強い耐性克服活性を有することが判明した.2.多剤耐性克服薬剤による耐性克服の機構我々は合成イソプレノイドSDBエチレンジアミンがある種の制癌剤の効果を増強し多剤耐性を克服することを明らかにした. この合成イソプレノイドの作用機構をさらに詳しく調べるため^<125>IでラベルしたSDBエチレンジアミンのフォトアフィニティー誘導体を合成した. フォトアフィニティーラベルの実験により, SDBエチレンジアミンは多剤耐性変異株KBーCh^Rー24より分離したmembrane vesicle の150ー170K蛋白質と特異的に結合することが判明した. この膜蛋白は分子量や多剤耐性変異株に存在し薬剤感受性親株には存在しないことなどからPー糖蛋白質と同一と考えられる. SDBエチレンジアミンと150ー170K蛋白質の結合は, 耐性克服薬剤ベラパミール,フェノチアジン系カルモジュリン阻害剤,レセルピンにより阻害された. 抗がん剤ビングラスチンもこの結合を阻害したがコルヒチンでは阻害することができなかった. 以上の結果よりSDBエチレンジアミンは能動排泄ポンプと考えられているPー糖蛋白質と結合すること, その結合部位は抗がん剤や他の耐性克服薬剤の結合部位と同一らしいことが明らかとなった.

1.克服多药耐药药物的筛选及构效关系研究了24种二氢吡啶衍生物的多药耐药克服活性，其中13种完全克服了多药耐药突变体KB-C_1的抗癌耐药性，9种部分克服了耐药性。，并且有两个物种没有克服抵抗力的活动。结果表明，完全克服抗性的组在低浓度下抑制长春花碱的光亲和衍生物^ 125 I-NASV对P-糖蛋白的光标记，但不具有抗性克服活性的组不抑制光标记。那。对结构和克服耐药活性的研究表明，衍生物的疏水性越强，克服耐药性的活性越强。 2.多药耐药药物的耐药机制为了研究这种合成类异戊二烯在药物中的作用机制。更详细地，我们合成了用^ 125 I标记的SDB乙二胺的光亲和衍生物。光亲和标记实验表明，SDB 乙二胺特异性结合从多重耐药突变体 KB-Ch^R-24 中分离的膜囊泡的 150-170K 蛋白，它被认为与 P-糖蛋白相同，因为它存在。 SDB乙二胺与150-170K蛋白的结合为它被克服耐药性的药物维拉帕米、吩噻嗪钙调蛋白抑制剂和抗癌药物万格斯汀抑制，但秋水仙碱不能抑制这种结合。从以上结果可以看出，SDB乙二胺是一种主动外排泵。结合位点与抗癌药物和其他抗耐药药物的结合位点相同。