ウッドチャック肝癌培養株ゲノム関連Enhancer・elementの解析

土拨鼠肝癌培养株基因组相关增强子/元件分析

• 批准号: 61570332
• 负责人: 小林 健一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570332/
• 关键词: ウッドチヤック肝細胞癌培異株; ウッドチヤック肝炎ウィルスゲノム; AC cluster; AT cluster; Enhancer活性; CATシステム; プラスミッド

教室で樹立しえたウッドチャック肝細胞癌培養株(WH257GE10:腫瘍倍加時間40時間)の150代目を用い、組み込まれた特異なclusterすなわちAC repeat sequenceおよびAT repeat sequenceと再編成なしに組み込まれていたウッドチャック肝炎ウィルスの約4分の1に相当するゲノムをサザン・トランスファー・モレキュラー・クローニングによって抽出し、プラーク培養により大量化した。このクローニングしえたDNAをスーパー・コイル状のプラスミッドDNAでトランスフェクトレ、クロランフェニコール・アセチールトランスフェラーゼ(CAT)システム内に挿入し、当該DNAがEnhancer・elementととしての性格を有するか否かを検定した。作製した当該DDAは前述の3つの領域すべてを含むプラスミッド109-2、AC clusterとWHVDNAの2つを含む107、AT clusterとWHVDNAを含む108-2、各々1つずつからなるプラスミッド123-8,124,125-4の計6つであった。すべてのプラスミッドがEnhancer活性を示したが、活性の強さはそれぞれ異なっており、もっとも強い活性を示したプラスミッドは107であり、以下124,123-8,125-4,108-2,109-2の順位であった。すなわち3つの領域すべてを含むプラスミッド109-2がもっとも弱い活性を示したが、このことは、ときにある部分がEnhancer活性に対して抑制的に働く場合もありうることを示したものであると思われる。さらにこれら活性を示したDNAプラスミッドが本来の培養株WH257GE10と子宮頸癌由来培養株HeLaのどちらにおいて、より強い活性を示すか否かをみた結果、むしろ後者の細胞においてより強いEnhancer活性を示した。Enhancer活性はときに種特異性を超えて作用するといわれてはいるが、さらに今後検討を要する課題である。

利用在课堂上建立的第150代土拨鼠肝癌培养系（WH257GE10：肿瘤倍增时间：40小时），我们发现独特的簇，即AC重复序列和AT重复序列，在没有重排的情况下整合在一起通过Southern转移分子克隆提取了相当于土拨鼠肝炎病毒约四分之一的基因组，并通过噬菌斑培养进行了批量生产。将此克隆的DNA用超螺旋质粒DNA转染并插入氯霉素乙酰转移酶(CAT)系统中，以确定该DNA是否具有作为增强子元件的特征。构建的DDA为包含上述所有三个区域的质粒109-2、包含两个AC簇和WHVDNA的质粒107、包含AT簇和WHVDNA的质粒108-2、以及各包含一个的质粒123-2，总共6, 8,124,125个。 -4。所有质粒都显示增强子活性，但活性强度不同，显示最强活性的质粒是107，其次是124,123-8,125-4,108-2,109-2。换句话说，包含所有三个区域的质粒109-2显示出最弱的活性，这表明某些区域有时可能对增强子活性具有抑制作用。此外，我们还检查了显示这些活性的 DNA 质粒在原始培养细胞系 WH257GE10 中或在宫颈癌衍生的培养细胞系 HeLa Ta 中是否表现出更强的活性。尽管据说Enhancer活性有时会超出物种特异性，但这是一个需要未来进一步研究的问题。

项目成果

MicroRNA-27a Regulates Lipid Metabolism and Inhibits Hepatitis C Virus Replication in Human Hepatoma Cells

MicroRNA-27a 调节人肝癌细胞中的脂质代谢并抑制丙型肝炎病毒复制

• DOI: 10.1128/jvi.03022-12
• 发表时间: 2013-02-28
• 期刊: Journal of Virology
• 影响因子: 5.4
• 作者: Takayoshi Shirasaki;M. Honda;Tetsuro Shimakami;Rika Horii;T. Yamashita;Y. Sakai;A. Sakai;Hikari Okada;Risa Watanabe;S. Murakami;M. Yi;S. Lemon;S. Kaneko
• 通讯作者: S. Kaneko