癌遺伝子を用いた実験的ヒト白血病モデルの作製

使用癌基因创建实验性人类白血病模型

基本信息

批准号：
61015015
负责人：
平井久丸
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1988
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015015/
关键词：
癌遺伝子トランスフェクション ras遺伝子 cDNA

项目摘要

ヒト癌細肪の高分子DNAをNIH3T3細胞に導入し活性化癌遺伝子を検出する実験系を用いることによって、各種のヒト癌細胞において優性な活性化癌遺伝子が同定・単離されている。この系を用いた場合の活性化癌遺伝子の検出率は10〜20%程度であり、それらの多くはras familyに属する遺伝子である。この検出率を上昇させる目的で、DNAをトランスフェクトしたNIH3T3細胞をヌード・マウスの皮下に接種し、細胞のトランスフォーメーションを腫瘍形成で判定するIn vivo Selection assay法を用いた。その結果、27例中18例で腫瘍形成を認め、うち9例にN-ras遺伝子、1例にK-ras遺伝子の活性化を認めた。この結果から、N-ras遺伝子の活性化はヒト白血病の発症に重要な役割を担うことが予想された。また白血病の前段階にあると考えられているMyelodysplastic Syndrome患者の骨髄細胞DNAを用いてIn vivo selection assay法を試みた結果、18例中10例に腫瘍形成を認め、うち3例にN-ras遺伝子の活性化を認めた。これら3例の活性化N-ras遺伝子を解析した結果、いずれも13番目のアミノ酸コドンの点突然変異が活性化の原因であり、AMLに認められる12番目もしくは61番目のアミノ酸コドンの点突然変異と異なることが明らかになった。これらのN-ras遺伝子のcDNAクローニングを行い、レトロベクターに導入することを試みている。一方、各種のLeukemiaにおいて異常発現の認められた、Src familyに属する癌遺伝子のcDNAクローニングも現在行っている。これらのcDNAを単独あるいは二者同時に造血前駆細胞に導入し、in vitroで白血病モデルを作製することを目的に研究を進行させている。

通过使用将人类癌细胞的高分子量DNA导入NIH3T3细胞来检测活化癌基因的实验系统，已经鉴定并分离了在各种人类癌细胞中占主导地位的活化癌基因。该系统对激活癌基因的检出率约为10-20%，其中大部分是属于ras家族的基因。为了提高检测率，我们采用体内选择测定方法，将DNA转染的NIH3T3细胞皮下接种到裸鼠体内，通过肿瘤形成来确定细胞转化。结果，27例中有18例观察到肿瘤形成，其中9例观察到N-ras基因激活，1例观察到K-ras基因激活。这些结果预测N-ras基因的激活在人类白血病的发展中起重要作用。此外，当我们尝试使用来自被认为处于白血病前期的骨髓增生异常综合征患者的骨髓细胞DNA进行体内选择测定时，在18名患者中的10名中观察到肿瘤形成，其中3名患有肿瘤。观察到N-ras基因激活。对这三个病例中激活的N-ras基因的分析表明，所有病例的激活原因都是第13个氨基酸密码子的点突变，而在AML中观察到的第12或61个氨基酸密码子的点突变已经变得很清楚。它是不同的。我们正在尝试克隆这些 N-ras 基因的 cDNA 并将其引入逆转录载体中。另一方面，我们目前正在克隆属于Src家族的癌基因的cDNA，已发现该家族在多种类型的白血病中异常表达。我们目前正在进行研究，旨在通过将这些 cDNA 单独或一起引入造血祖细胞来体外创建白血病模型。