神経細胞におけるカルシウム応答遺伝子群の同調的な転写制御機構の解析

神经元钙反应基因同步转录调控机制分析

• 批准号: 11154208
• 负责人: 津田 正明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11154208/
• 关键词: ニューロン; カルシウム; BDNF; NT-3; プロモーター; NRSF; ニューロトロフィン

1.脳由来神経栄養因子(BDNF)遺伝子のカルシウム応答性の解析: ラット大脳皮質初代神経細胞培養系におけるニューロンヘのカルシウム(Ca^<2+>)流入口は、主にNMDAレセプターとL-型カルシウムチャネル(L-VDCC)の二つである。これら流入口の異なるCa^<2+>に対するBDNF遺伝子プロモーターI,IIIの応答性を調べた所、プロモーターIIIはL-VDCC及びNMDAレセプターからのCa^<2+>に応答するが、プロモーターIはL-VDCCからのCa^<2+>流入だけに応答することが明らかとなった。2.BDNFプロモーターIのカルシウム応答エレメントの同定: 5′-及び部分欠失遺伝子群の解析から、-300〜-200と-120〜-80の領域に強いカルシウム応答性のあることが示された。変異型プロモーターを用いた実験から、少なくともCREやTREが関与していることが示された。現在、その詳細を検討中である。3.NT-3遺伝子の発現抑制機構の解析: ニューロトロフィン-3(NT-3)遺伝子は、Ca^<2+>流入で発現抑制を受ける。プロモーター解析の結果、Ca^<2+>応答領域は-120以下に存在すること、及び、-14-〜-120に強いサイレンサーエレメントが存在し、それを-1000上流に存在する活性が抑制していることが示された。4.NRSFスプライスバリアントの効果: 神経細胞で発現されているNRSF(neuron-restrictive Silencer element-binding factor)のスプライスバリアント(NRnV)の、NRSFに対する効果をBDNFプロモーターIを用いて調べた。その結果、NRnVの過剰発現はNRSFの転写抑制活性に拮抗した。BDNFプロモーター活性化にも、クロマチン構造がその制御に関与している可能性が強い。

1。分析脑源性神经营养因子（BDNF）基因的钙反应性：大鼠脑皮质中原代神经元细胞培养系统中钙（Ca^<2+>）入口的钙（Ca^<2+>）的入口是NMDA受体和L型钙通道（L-vDCC）。当我们研究了这些入口处的BDNF基因启动子I和III对不同的Ca^<2+>的响应性时，发现启动子III对L-VDCC和NMDA受体的CA^<2+>响应，而启动子I仅响应Ca^<2+>从L-vdcc响应。 2。鉴定BDNF启动子I的钙响应元素：对5'-和部分删除的基因组的分析表明，区域-300---200和-120---80区域具有强烈的钙响应性。使用突变启动子的实验表明，至少涉及CRE和TRE。详细信息目前正在考虑。 3。抑制NT-3基因表达的机理：神经营养蛋白3（NT-3）基因受CA^<2+>涌入的表达抑制。启动子分析表明，CA^<2+>响应区域位于-120以下，并且有一个沉默元件在-14至-120中很强，并且抑制了-1000上游的活动。 4。NRSF剪接变体的影响：使用BDNF启动子I的剪接变体变体（NRNV）对NRSF的剪接变体（NRNV）的影响。结果，NRNV的过表达对NRNV的过表达拮抗NRNV的NRNV过表达。染色质结构也很有可能参与BDNF启动子激活。

项目成果

津田正明: "「衛生薬学」中島憲一郎・早川和一編"廣川書店.

津田正明：《卫生药学》，中岛健一郎、早川一一主编，广川书店。

津田正明: "神経細胞におけるカルシウム応答遺伝子群"生化学. 71. 515-520 (1999)

Masaaki Tsuda：“神经细胞中的钙反应基因组”生物化学 71. 515-520 (1999)。

Tabuchi, A.: "Silencer-mediated repression and non-mediated activation of BDNF and c-fos gene promoters in primary glial or neuronal cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 261. 233-237 (1999)

Tabuchi, A.：“原代胶质细胞或神经元细胞中 BDNF 和 c-fos 基因启动子的沉默介导的抑制和非介导的激活”Biochem。