細胞質分裂期におけるリン酸化ミオシンIIの役割解明に関する研究

磷酸化肌球蛋白II在胞质分裂过程中的作用研究

基本信息

批准号：
10213206
负责人：
細谷浩史
金额：
$ 33.09万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞分裂期におけるミオシンリン酸化の役割解明を目的として、ヒーラ細胞を実験材料に使用して以下の成果を得た。1.19Serがリン酸化されたミオシン調節軽鎖を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製した。2.18Thrおよび19Serの2ケ所が2重リン酸化されたミオシン調節軽鎖を特異的に認識するモノクローナル抗体を作成した。3.これらの抗体を用いて、間期および分裂期のヒーラ細胞を染色したところ、間期の細胞ではストレスファイバーが染色され、分裂期の細胞では収縮環の領域が染色されることが明らかになった。4.2重リン酸化ミオシンに対する抗体およびミオシン重鎖の抗体を用いて分裂期の細胞を2重染色したところ、収縮環領域では、前者はdisc状に染色像が観察されたが、後者の染色像はリング状であることが明らかになった。これらの結果から、収縮環でミオシン重鎖と軽鎖が必ずしも共局在しないという事実が明らかにされた。5.ミオシン調節軽鎖のリン酸化部位に関する変異体を作成しヒーラ細胞への導入を行ったところ、18Thrおよび19Serにアスパラギン酸を導入した疑似2重リン酸化ミオシン調節軽鎖を導入した細胞では、細胞分裂の阻害は特に観察されないが、これらの変異ミオシン調節軽鎖は収縮環領域に局在することが明らかにされた。19Serにアスパラギン酸を導入した疑似1重リン酸化ミオシン調節軽鎖の場合でも同様の結果が観察されたが、収縮環への局在は前者ほど顕著ではなかった。また野生型ミオシン調節軽鎖を導入した場合では、収縮環への局在は顕著に観察されなかった。

为了阐明在细胞分裂阶段肌球蛋白磷酸化的作用，使用HERA细胞作为实验材料获得了以下结果。产生了单克隆抗体，该抗体专门识别1.19ser磷酸化的肌球蛋白调节的轻链。制备了单克隆抗体，该抗体专门识别2.18THR和19SER的双磷酸化肌球蛋白调节的光链。 3。当用这些抗体染色相间和有丝分裂治疗剂细胞时，揭示了应力纤维在相间细胞中染色，并在有丝分裂细胞中染色区域。 4。当使用针对双磷酸化肌球蛋白和肌球蛋白重链的抗体对有丝分裂细胞进行双重染色时，前者在收缩环区域以盘状方式染色，但后者以环状方式染色。这些结果揭示了一个事实，即肌球蛋白重和轻链不一定会在收缩环中共定位。 5。当创建与肌球蛋白调节的光链的突变体相关的突变体时，并将其引入HERA细胞时，发现细胞分裂并不是特别观察到的细胞中并没有特别在细胞中观察到，这些细胞中的细胞并不特别地引入了通过模拟的双磷酸化的肌球蛋白调节的光链引入18thr和19thr的肿瘤，但将这些链条引入了这些突变区域，但将其置于这些链中，并将其定位为旋转链，并将其定位为旋转序列。在伪单词磷酸化的肌球蛋白调节的轻链中观察到了类似的结果，其中将天冬氨酸引入19ser中，但是收缩环的定位不如前者那么明显。此外，当引入野生型肌球蛋白调节轻链时，未观察到合同环的明显定位。