歯の移動時の圧迫側、牽引側歯根膜細胞におけるhsp27遺伝子発言の検索

寻找牙齿移动过程中受压侧和牵引侧牙周膜细胞中 hsp27 基因的表达

基本信息

批准号：
08672357
负责人：
須佐美隆史
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672357/
关键词：
hsp27 Waldo法歯根膜歯の移動

项目摘要

歯の移動という歯科矯正学の最も基本的な過程において、物理的な力が化学的構造を変化させる際に重要と考えられるhsp27の発現を検索する目的で以下の実験を行った。ラット右側上顎第1大臼歯、第2大臼歯間にWaldoの方法に従ってゴムを挿入し、反対側同部位を対照とした。ゴム挿入2時間後、上顎を摘出し、10%ホルマリンに固定を4時間施行した後、5%EDTA/6%Sucrose溶液に標本を浸漬して、4℃にて1カ月間脱灰した。脱灰終了後、通法に従ってアルコール脱水、パラフィン包埋を行い、5μmの薄切切片を作成した。これら切片に対し、抗hsp27抗体を用いて免疫染色を行い、光学顕微鏡にて観察した。その結果、対照側歯根膜においては、歯頚部付近、歯根中央部、根尖付近いずれにおいても、ごく限られた細胞に少量のhsp27の発現が観察されたにとどまった。これに対して、実験側ではいずれの部位においても、圧迫側、牽引側を問わず、多量のhsp27の発現が観察された。従って、ラット上顎大臼歯においては、歯間部へのゴム挿入という機械的ストレスにより、歯根膜でhsp27が多量に発現することが確認された。現在、歯根膜内のどの様な細胞がどの程度のhsp27を発現するかの詳細を検討すべく、薄切切片の質を向上させて検討するとともに、最長14日後までの経時的な発現パターンを観察することを試みている。また、同様な薄切切片を用いて、hsp27のcDNAをプローブとしたin situハイブリダイゼーションも行う予定である。一方、イヌまたはヒトを用いた歯の移動の実験により、mRNAの発現レベルを検索する目的で、RT-PCRも行うことを考えている。

在牙齿迁移的最基本过程中，进行了以下实验以搜索HSP27的表达，当物理力改变化学结构时，这被认为很重要。根据Waldo的方法，将右上颌大鼠的第一和第二磨牙插入橡胶，并将对侧部分用作对照。插入橡胶后两个小时，将上颌骨除去，将福尔马林固定4小时，然后将样品浸入5％EDTA/6％蔗糖溶液中，并在4°C下脱钙1个月。脱矿化完成后，根据常规方法进行酒精脱水和石蜡嵌入，并制备薄5μm切片。这些切片使用抗HSP27抗体进行免疫染色，并在光学显微镜下观察到。结果，在控制牙周韧带中，在颈部，根的中心部分和根的顶部部分的细胞数量非常有限的细胞中观察到少量的Hsp27表达。相比之下，在实验侧，无论压缩或牵引侧如何，在任何位点都观察到大量的Hsp27表达。因此，已经证实，在大鼠上颌磨牙中，由于机械应力（例如橡胶插入到牙间区域），在牙周韧带中表达了大量的Hsp27。目前，为了检查牙周韧带中哪些细胞表达哪些细胞的细节，我们正在尝试提高薄部分的质量，并在14天后观察表达模式。还计划使用相同薄片的原位杂交使用Hsp27的cDNA作为探针进行。另一方面，我们还考虑使用RT-PCR来通过使用狗或人类进行牙齿迁移的实验来搜索mRNA表达水平。