グアニリン産生細胞の免疫学的、分子生物学的同定とその生理作用の研究

鸟苷酸产生细胞的免疫学和分子生物学鉴定及其生理作用研究

• 批准号: 08670578
• 负责人: 成瀬 達
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670578/
• 关键词: グアニリン; プログアニリン; 免疫組織化学; 内分泌; 受容体; オートラジオグラフィー; 消化管; 腎臓; グアニリン; プログアニリン; 免疫組織化学; 内分泌; 受容体; オートラジオグラフィー; 消化管; 腎臓

大腸菌の熱耐性エンテロトキシンに類似の構造をもつペプチド、グアニリンの産生細胞を同定するために、ヒトのプログアニリンのN端フラグメント(1-15)を化学合成した。サイログロブリンまたはKLHとコンジュゲートした合成ペプチドを抗原として、家兎に免疫し、プログアニリンN端フラグメントに特異抗体を得た。本抗体を用いて、プログアニリン産生細胞を免疫組織学的に検索した。本抗体によりヒトの胃および十二指腸の基底膜顆粒細胞が免疫染色された。この反応は、抗体に合成フラグメントを添加することにより完全に吸収された。ヒトと同様にラットでも、消化管の内分泌細胞が特異的に染色された。同一切片における二重染色によりプログアニリン陽性細胞はセロトニンを含有せず、ソマトスタチンを含有することから、D細胞であると推定された。グアニリンの受容体および標的細胞を同定するために、ラクトパーオキシデ-ス法により、^<125>I標識グアニリンを作成した。標識グアニリンのラット小腸粘膜標本に対する結合実験からグアニリンは耐熱性エンテロトキシンと同等の解離定数(約10^<-6>M)をもつことが判明した。この標識グアニリンをラットに経静脈的に投与し、in vivoオートラジオグラフィーを行った。最も放射活性の取り込みの高い臓器は腎臓であった。消化管では杯細胞からの粘液の分泌と粘膜下組織の浮腫を認めた。一方、腎臓では近位尿細管上皮からの取り込みと、集合管の主細胞からの尿中への排泄ならびに利尿効果が形態学的に認められた。以上の成績から、グアニリンは、当初考えられたいたように消化管の管腔内に分泌されるだけでなく、パラクラインホルモンとして消化管粘膜における水の吸収と、内分泌ホルモンとして腎臓における尿生成の調節に関与している可能性が考えられた。

为了鉴定产生鸟氨酸细胞的细胞，具有类似于大肠杆菌的耐热性肠毒素的结构的肽，对前卫的N末端片段（1-15）进行了化学合成。使用与甲状腺球蛋白或KLH作为抗原的合成肽对兔子进行免疫，以获得对加苯胺N末端片段的特异性抗体。该抗体用于免疫组织化学搜索产生的产生细胞。这种抗体免疫染色的人胃和十二指肠基底膜颗粒细胞。通过在抗体中添加合成片段，完全吸收了该反应。在大鼠和人类中，胃肠道中的内分泌细胞被明确染色。在所有碎片上进行双重染色表明，丙摩酰胺阳性细胞是D细胞，因为它们不含5-羟色胺，并且确实含有生长抑素。为了鉴定鸟氨酸受体和靶细胞， ^<125> I标记的鸟氨酸是通过乳糖氧化物方法产生的。在大鼠小肠粘膜标本上标记的鸟氨酸的结合实验表明，鸟根具有与热耐药肠毒素等效的解离常数（约为10^<-6> m）。该标记的鸟氨酸是静脉内给大鼠施用的，并进行体内放射自显影。放射性吸收最高的器官是肾脏。胃肠道显示了杯状细胞的粘液分泌和粘膜下组织的水肿。另一方面，在肾脏中，近端管状上皮的吸收，收集管的主要细胞排泄到尿液中，并从形态上观察到利尿作用。从以上结果来看，可以认为鸟嘌呤不仅被认为是最初认为的胃肠道腔内，而且还可能参与胃肠道粘膜中的水吸收，作为旁氨基激素，以及在肾脏中作为内分泌激素的尿液产生的调节。