u鎖分子複合体のアッセンブリとシグナル伝達関連因子のクローニング

u链分子复合物的组装及信号转导相关因子的克隆

• 批准号: 08670378
• 负责人: 大西 和夫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670378/
• 关键词: プレB細胞受容体; μ鎖分子複合体; アッセンブリ; 小胞体; シグナル伝達; 分化シグナル; クローニング

μ鎖・代理軽鎖分子複合体(プレB細胞受容体)のアッセンブリまたはシグナル伝達に関与すると考えられる因子の同定・クローニングについて2つのアプローチをとった。1つは、免疫沈降法に基づいた生化学的方法によってμ鎖・代理軽鎖と複合体を形成する分子を精製し、その部分アミノ酸配列を得、クローニングを試みる方法で、現在までに5個の異なる分子のアミノ酸部分配列を得た。これらのうち2個は未知の配列であった。このうち、抗代理軽鎖抗体で免疫沈降する分子量46kの分子から得られた25残基の未知のアミノ酸配列は、興味あるモチーフを内在しており、シグナル伝達に関与する分子である可能性が高い。現在、PCR/RACE法によるクローニングを行っている。2つめのアプローチとして、進化的に保存されたアミノ酸配列に基づくPCRプライマーをデザインすることによって、機能分子のクローニングを試みている。酵母において、小胞体に局在し、様々な分子複合体のアッセンブリの状態を反映したシグナル核に送る分子として報告されたIRE1遺伝子の中に、進化的に保存された領域を見つけた。この領域を利用したPCRプライマーを5セット作成し、PCR/RACEによるクローニングを試みている。本研究の主眼は、マウスリンパ球(B細胞)において、酵母同様、小胞体から核へのシグナル経路があるのか、あるとすればどのような因子が関与するのかを知ることであるが、このシグナル経路の存否を知る実験として、ER-retension signal(KKXX-motif)をμ鎖のC末端に付加した遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを作成した。理論的には、このトランスジェニックμ鎖は、小胞体にとどまり、細胞表面には発現しないはずである。そこで、小胞体にとどまったμ鎖・代理軽鎖分子複合体がB細胞分化シグナルの伝達を行うかを現在解析中である。

采用了两种方法来识别和克隆因子，这些因子被认为与μ-链 - 流式光链分子复合物（前B细胞受体）的组装或信号传导有关。一种方法是一种方法，即通过免疫沉淀的生化方法纯化与μ链和替代光链形成复合物的分子，从而获得了MU链和替代光链的部分氨基酸序列，并尝试在氨基酸链中进行克隆，并在氨基酸及以下五个不同的分子中产生。其中两个是未知的序列。其中，从分子量为46K的分子量获得的25种残基的未知氨基酸序列，用抗酸酯轻链抗体具有46K免疫沉淀，具有兴趣基序，并且很可能是参与信号转导的分子。目前，使用PCR/Race方法进行克隆。第二种方法是试图通过基于进化保守的氨基酸序列设计PCR引物来克隆功能分子。在酵母中，在IRE1基因中发现了一个进化保守的区域，据报道是局部局部网状的分子，并将其发送到反映各种分子复合物的组装状态的信号核。使用该区域创建了五组PCR引物，并通过PCR/Race尝试了克隆。这项研究的主要重点是知道是否有从内质网到细胞核的信号途径，就像在酵母中，小鼠淋巴细胞（B细胞）一样，以及涉及哪些因素。为了确定该信号途径是否存在，我们创建了一个转基因小鼠，其中将ER退休信号（KKXX-MOTIF）添加到μ链的C端。从理论上讲，该转基因链应保留在内质网中，而不在细胞表面表达。因此，我们目前正在分析保留在内质网中的μ链 - 流式光链复合物是否会传递B细胞分化信号。