カルシウム／カルモデュリン依存性多機能性蛋白質燐酸化酵素を介する情報伝達機構

钙/钙调蛋白依赖性多功能蛋白磷酸酶介导的信息转导机制

基本信息

批准号：
08408034
负责人：
藤沢仁
金额：
$ 22.14万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

1.カルシウム/カルモデュリン依存性蛋白質燐酸化酵素II(CaMキナーゼII)(1)CaMキナーゼIIの自己燐酸化部位であるスレオニン-286を特異的に脱燐酸化する酵素が脳に存在することをゲル内アッセイ法で明らかにし、CaMキナーゼIIがスレオニン-286の燐酸化と脱燐酸化によって活性が調節されている可能性を示した。(2)CaMキナーゼIIのスレオニン-286を特異的に脱燐酸化する新しい蛋白質脱燐酸化酵素をラット脳から純粋に精製し、その性質を明らかにした。(3)CaMキナーゼIIの遺伝子から発現する蛋白質αKAPの細胞内分布を特異抗体を用いて明らかにした。2.カルシウム/カルモデュリン/キナーゼ/キナーゼ・カスケード(1)CaMキナーゼIVが上流のCaMキナーゼキナーゼによって燐酸化される部位を燐酸化ペプチドの解析によりN末端から196番目のスレオニンであることを明らかにした。(2)CaMキナーゼキナーゼのアイソフォーム(CaMキナーゼキナーゼβ)をラットの小脳からクローニングして組み換え酵素を発現させた。さらにβアイソフォームに特異的な抗体を調整して脳内部位分布を調べ、αアイソフォームの分布と比較した。(3)CaMキナーゼキナーゼαの組み換え酵素を用いて基質特異性を調べた。(4)CaMキナーゼIVがCa^<2+>/カルモデュリンによってCaMキナーゼキナーゼ低感受性型酵素に転換されることを見出し、CaMキナーゼカスケードの新しい制御機能の可能性を示した。

1。钙/钙调蛋白依赖性蛋白磷酸化酶II（CAM激酶II）（1）Intragel分析表明，一种特异性去磷酸化的酶-286，CAM激酶II的自磷酸化位点，CAM激酶II的自磷酸化位点，表明在脑酶II的活动中建立了依恋，并指示ii的活性。 Threonine-286。（2）一种新的蛋白质去磷酸化酶，该酶特异性地将CAM激酶II苏氨酸-286纯净地纯化从大鼠脑中纯化，以揭示其特性。（3）使用特定抗体揭示了从CAM激酶II基因表达的蛋白αKAP的细胞内分布。 2。钙/钙调蛋白/激酶/激酶级联反应（1）通过分析通过分析磷酸化肽的分析，上游CAM激酶激酶磷酸化的位点是在N末端从N-末端磷酸化的。（2）CAM激酶激酶（CAM激酶激酶β）的同工型从大鼠小脑克隆以表达重组酶。此外，调整了对β亚型特异性的抗体以检查脑位点的分布，并与α同工型的分布进行了比较。（3）使用CAM激酶激酶α的重组酶研究了底物特异性。（4）我们发现CAM激酶IV被CA^<2+>/钙调蛋白转化为CAM激酶 - 低敏感酶，表明CAM激酶级联反应具有新的调节功能。