in vivoカルシウムイメージングを用いた客観的疼痛評価方法の確立

利用体内钙成像建立客观疼痛评估方法

• 批准号: 22KJ0196
• 负责人: 工藤 葉子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0196/
• 关键词: 口腔顔面痛; 蛍光カルシウム蛋白; 慢性疼痛; カルシウムイメージング; 口腔顔面痛モデル動物; G-CaMP; 二光子顕微鏡

本年度は安定して遺伝子組み換え動物を供給できる環境を作ることに重きを置き、外部の施設で繁殖をしてくださっている先生と連携を行った。繁殖中の遺伝子組み換え動物の様子を確認しつつ、遺伝子組み換え動物以外の動物を用いながら、安定した手術手技の確立と、評価方法の確立を目指した。通常の動物でも侵襲を伴う手術であるため、毎回同じような神経損傷モデルを作製することに苦戦している。手術の麻酔方法もまだ吸入麻酔薬でしか行えておらず、静脈麻酔薬を用いての手術方法の実践や、顕微鏡で観察する際に静脈麻酔で維持させる装置の確立も並行して進めている。また、遺伝子組み換え動物でなくても本実験の目的を達成させるために同じ実験系を確立できないか試行錯誤をしており、代替となる蛍光色素などを検討している。脳神経細胞に蛍光カルシム蛋白を発現していない遺伝子組み換え動物を使用する場合には、観察可能な脳の領域も異なるため、本実験の目的を達成するのにふさわしい脳領域の観察が可能かどうか、手術方法も可能かどうかを含めて総合的に検討を行っている。動物実験を行うのにも限りがあるので、動物実験ができない期間には、実際の慢性疼痛患者の大規模コホート研究のデータを使用させていただきながら、実験データの処理方法にも関与する統計学の知識を学んだ。慢性疼痛患者の疫学的特徴や治療方法の実際を学ぶことで代替で観察する脳領域の候補についても理解を深めることができた。動物実験のデータをまとめていく上でも疫学統計の知識と技術は非常に重要であり、今後結果をまとめていく際に学んだ知識と技術を活かしたい。

今年，我们致力于创造一个可以稳定供应转基因动物的环境，并与在外部设施繁殖的老师合作。其目的是建立稳定的手术技术和评估方法，同时检查转基因动物在饲养和使用非转基因动物期间的状况。由于该手术即使对于正常动物来说也是侵入性的，因此很难每次都创建类似的神经损伤模型。手术麻醉仍然只能使用吸入麻醉剂，并且正在努力实施使用静脉麻醉剂的手术方法，并建立在显微镜下观察期间维持静脉麻醉的装置。此外，我们正在进行反复试验，看看是否可以在不使用转基因动物的情况下建立相同的实验系统来实现本实验的目的，并正在考虑替代荧光染料。当使用大脑神经元不表达荧光钙蛋白的转基因动物时，可观察的大脑区域会有所不同，因此检查是否可以观察适当的大脑区域以实现本实验的目的非常重要。正在进行全面审查，包括手术方法是否可行。由于进行动物实验的能力有限，在无法进行动物实验的时期，我们使用来自实际慢性疼痛患者的大规模队列研究的数据，并且我们还进行涉及处理的统计研究。学到了实验数据的知识。通过了解慢性疼痛患者的流行病学特征和实际治疗方法，我们能够加深对替代观察的候选大脑区域的了解。流行病学统计方面的知识和技能在整理动物实验数据时非常重要，我希望在以后整理结果时能够运用所学到的知识和技能。