視床下部・下垂体細胞におけるレチノイドXレセプターのホルモンによる調節機構

下丘脑和垂体细胞中视黄醇X受体的激素调节机制

基本信息

批准号：
07770819
负责人：
菅原明
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770819/
关键词：
下垂体甲状腺ホルモンレチノイドXレセプター TSH

项目摘要

(1)動物実験:メルカゾール投与により作成した甲状腺機能低下ラットおよび正常ラットの下垂体前葉組織切片を作成し、レチノイドXレセプター(RXR)の各サブタイプ(α,β,γ)に特異的な抗体を用いて免疫染色を行なった。RXRαおよびβは下垂体前葉のほぼ全細胞で陽性であり、正常および甲状腺機能低下ラット間での差異は認められなかった。RXRγは正常ラット下垂体前葉において、ごくわずかの細胞でのみ陽性であった。しかしながら、甲状腺機能低下ラットの下垂体前葉においては、RXRγ陽性細胞数の著明な増加が認められた。さらに細胞当たりの陽性度も著明に増加したことから、RXRγの発現が甲状腺ホルモンにより負の調節を受けている可能性が示唆された。つぎに、いずれの下垂体前葉細胞においてRXRγが発現しているかを明らかにする目的で、抗XARγ抗体と各下垂体前葉ホルモンに対する抗体を用いて二重染色を行なった。その結果、RXRγ陽性細胞の殆どがTSH産生細胞であり、他の前葉ホルモン産生細胞では殆どRXRγが発現していないにことが明らかとなった。以上より、RXRγがTSH産生細胞における遺伝子調節や細胞分化に関与している可能性が推定された。(2)培養細胞を用いての実験:下垂体前葉系培養細胞より抽出した核タンパクをゲルシフトアッセイにより解析したところ、成長ホルモン産生細胞であるGH3細胞およびゴナドロピン産生細胞であるαT3細胞の両者において、RXRβタンパクの豊富な発現が認められた。つぎに、RXRβの甲状腺ホルモンによる発現調節を明らかにする目的でウエスタンブロットを施行した。その結果、GH3細胞においては甲状腺ホルモン添加によりRXRβタンパクの発現低下が認められた一方で、αT3細胞においては同様の調節は認められなかった。この差は各細胞における甲状腺ホルモンレセプターの含有量の違いによるものと考えられた。現在、マウスRXRβ遺伝子をGH3細胞にトランスフェクションし、ルシフェラーゼアッセイによって解析を行なう準備を進めている。

(1)动物实验：我们制备了甲状腺功能减退大鼠和通过施用美唑醇制备的正常大鼠的垂体前叶组织切片，并使用对类视黄醇X受体(RXR)各亚型(α、β、γ)特异的抗体进行免疫染色。 RXRα和β在几乎所有垂体前叶细胞中均呈阳性，正常大鼠和甲状腺功能减退大鼠之间没有观察到差异。正常大鼠垂体前叶仅有少数细胞RXRγ呈阳性。然而，在甲状腺功能减退大鼠的垂体前叶中观察到 RXRγ 阳性细胞数量显着增加。此外，每个细胞的阳性率也显着增加，表明RXRγ表达可能受到甲状腺激素的负向调节。接下来，为了明确RXRγ在哪个垂体前叶细胞中表达，使用抗XARγ抗体和针对各垂体前叶激素的抗体进行双重染色。结果显示，大多数RXRγ阳性细胞是产生TSH的细胞，而其他前叶激素产生细胞几乎不表达RXRγ。由此推测RXRγ可能参与TSH产生细胞的基因调控和细胞分化。 (2)使用培养细胞的实验：当通过凝胶转移分析对从培养的垂体前叶细胞中提取的核蛋白进行分析时，发现GH3细胞(生长激素产生细胞)和αT3细胞(促性腺激素产生细胞)观察到RXRβ蛋白的大量表达。接下来，进行蛋白质印迹以阐明甲状腺激素对 RXRβ 表达的调节。结果，在GH3细胞中，添加甲状腺激素可以降低RXRβ蛋白的表达，而在αT3细胞中，没有观察到类似的调节。这种差异被认为是由于每个细胞中甲状腺激素受体含量的差异造成的。我们目前正准备将小鼠 RXRβ 基因转染到 GH3 细胞中，并使用荧光素酶测定对其进行分析。