ウシ乳腺細胞におけるプロラクチン受容体の情報伝達経路および発現調節に関する研究

牛乳腺细胞催乳素受体信号转导通路及表达调控研究

• 批准号: 07760308
• 负责人: 中田 健
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760308/
• 关键词: プロラクチン; 乳腺上皮細胞; 細胞培養

泌乳は哺乳動物に特異的な生理現象であり、この現象は数多くのホルモンにより調節されていることが知られている。泌乳をつかさどる乳腺におけて特にプロラクチンが乳腺上皮細胞の増殖、分化および乳汁分泌活動に重要な役割を担っている。このプロラクチンの情報を細胞内へ伝達するためには、細胞膜上に受容体が存在することが重要である。乳腺細胞ではプロラクチン受容体が、妊娠期に増加、泌乳期に増加および減少することが報告されているが、この調節機構は明らかにされていない。本研究では、in vitroで単純化された系を用いてこれらの現象を明らかにするために、本研究に利用できるウシ乳腺細胞の培養系を確立することを第一に研究を行った。分娩後1ケ月以内に屠殺・解剖されたウシおよび乾乳期のウシから乳腺組織を回収し、細切した後酵素処理により乳腺細胞に分離・単離を行った。乳腺細胞を酵素処理後600gにて遠心回収した細胞および細胞魂は800gにて遠心回収した細胞よりも凍結保存後の生存率がよいことが分かった。培養法にプレート上の2次元培養とコラーゲンゲル上の2次元培養の比較を行ったところ、コラーゲンゲルを用いた培養がより増殖の割合が高かった。その後は、コラーゲンゲル上に1週間培養した細胞の回収をコラゲナーゼとトリプシンにより行った。プロラクチンによる細胞内カルシウムイオン濃度([Ca]i)の変化を測定するために、Ca^<2+>の径行指示薬であるfura-2 AMを取り込ませ、[Ca]iの測定を行っている途中でプロラクチンを投与したが、[Ca]iの変化が捕らえられなかった。この原因については、現在検討中であり、細胞回収時の処理方法および培養プレートを直接Caイメージプロセッサーにのせ[Ca]iを測定する方法も検討中である。

泌乳是一种哺乳动物特异性的生理现象，众所周知，这种现象受许多激素调节。催乳素尤其是乳腺中乳腺上皮细胞的增殖，分化和分化和牛奶分泌活性的重要作用，该腺体控制乳腺。为了将这些催乳素信息传输到细胞中，重要的是将受体存在于细胞膜上。据报道，催乳素受体在妊娠期间增加，乳腺细胞中泌乳期间增加和减少，但是这种调节机制尚未澄清。在这项研究中，我们首先进行了研究，以使用体外简化系统来阐明这些现象，从而建立了可以在本研究中使用的牛乳细胞培养系统。从分娩后的一个月内从杀死的牛和解剖的牛和解剖的乳腺组织中收集乳腺组织，然后通过酶处理将牛杀死和解剖，然后通过酶处理切入乳细胞。发现在酶处理后通过600g离心和细胞治疗后的细胞灵魂收集的细胞在冷冻保存后的存活率比以800g的离心收集的细胞的生存率更好。当在板上的二维培养物和胶原蛋白凝胶上的二维培养物之间进行比较时，使用胶原蛋白凝胶的培养物显示出更高的生长速度。之后，通过胶原酶和胰蛋白酶收集在胶原蛋白凝胶上培养的细胞一周。为了测量由催乳激素fura-2 am（Ca^<2+>的直径指示剂）引起的细胞内钙离子浓度（[Ca] i）的变化，并在测量[Ca] I时施用了催乳素，但是[Ca]的变化我没有被捕获。目前正在研究的原因，以及通过将培养板直接放置在CA图像处理器上的细胞回收过程和测量[CA] I的方法的方法。