ウシ乳腺細胞におけるプロラクチン受容体の情報伝達経路および発現調節に関する研究

牛乳腺细胞催乳素受体信号转导通路及表达调控研究

• 批准号: 07760308
• 负责人: 中田 健
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760308/
• 关键词: プロラクチン; 乳腺上皮細胞; 細胞培養

泌乳は哺乳動物に特異的な生理現象であり、この現象は数多くのホルモンにより調節されていることが知られている。泌乳をつかさどる乳腺におけて特にプロラクチンが乳腺上皮細胞の増殖、分化および乳汁分泌活動に重要な役割を担っている。このプロラクチンの情報を細胞内へ伝達するためには、細胞膜上に受容体が存在することが重要である。乳腺細胞ではプロラクチン受容体が、妊娠期に増加、泌乳期に増加および減少することが報告されているが、この調節機構は明らかにされていない。本研究では、in vitroで単純化された系を用いてこれらの現象を明らかにするために、本研究に利用できるウシ乳腺細胞の培養系を確立することを第一に研究を行った。分娩後1ケ月以内に屠殺・解剖されたウシおよび乾乳期のウシから乳腺組織を回収し、細切した後酵素処理により乳腺細胞に分離・単離を行った。乳腺細胞を酵素処理後600gにて遠心回収した細胞および細胞魂は800gにて遠心回収した細胞よりも凍結保存後の生存率がよいことが分かった。培養法にプレート上の2次元培養とコラーゲンゲル上の2次元培養の比較を行ったところ、コラーゲンゲルを用いた培養がより増殖の割合が高かった。その後は、コラーゲンゲル上に1週間培養した細胞の回収をコラゲナーゼとトリプシンにより行った。プロラクチンによる細胞内カルシウムイオン濃度([Ca]i)の変化を測定するために、Ca^<2+>の径行指示薬であるfura-2 AMを取り込ませ、[Ca]iの測定を行っている途中でプロラクチンを投与したが、[Ca]iの変化が捕らえられなかった。この原因については、現在検討中であり、細胞回収時の処理方法および培養プレートを直接Caイメージプロセッサーにのせ[Ca]iを測定する方法も検討中である。

哺乳是哺乳动物特有的一种生理现象，已知这种现象受到多种激素的调节。在负责泌乳的乳腺中，催乳素在乳腺上皮细胞的增殖和分化以及乳汁分泌活性中发挥着重要作用。为了将催乳素信息传递到细胞中，细胞膜上存在受体非常重要。有报道乳腺细胞中催乳素受体在妊娠期间增加，哺乳期间增减，但其调节机制尚未阐明。在本研究中，为了使用简化的体外系统阐明这些现象，我们首先进行研究以建立可用于本研究的牛乳腺细胞培养系统。产犊后1个月内屠宰解剖的奶牛和干奶期奶牛采集乳腺组织，切成小块，然后通过酶处理分离分离成乳腺细胞。结果发现，乳腺细胞酶处理后600g离心收集的细胞和细胞魂在冷冻保存后的存活率比800g离心收集的细胞更好。当我们比较平板上的二维培养和胶原凝胶上的二维培养时，我们发现使用胶原凝胶的培养具有更高的增殖率。此后，使用胶原酶和胰蛋白酶收集在胶原凝胶上培养1周的细胞。为了测量由于催乳素引起的细胞内钙离子浓度([Ca]i)的变化，我们掺入了Ca 2+ 指示剂fura-2 AM，并在治疗过程中施用了测量的[Ca]i。治疗，但未检测到 [Ca]i 变化。目前正在调查其原因，并且我们也在研究细胞收集时的处理方法以及将培养板直接放置在Ca图像处理器上测量[Ca]i的方法。