コムギ配偶子致死遺伝子の染色体切断機構の解明:切断点のDNA配列の解析

阐明小麦配子致死基因的染色体断裂机制：断点DNA序列分析

• 批准号: 07740586
• 负责人: 辻本 壽
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07740586/
• 关键词: コムギ; Triticum aestivum; 配偶子致死遺伝子; 染色体切断; テロメア-; rDNA; 仁形成体; DNA配列

1.コムギ近縁種Aegilops cylindricaの配偶子致死遺伝子の作用によってコムギの1B染色体に欠失またはその他の異常をホモ接合にもつ個体を多数作った。2.この中には、短腕の仁形成体を切断点とする異常染色体が4系統で認められた。3.これらの系統および、Endo and Gillが作成した4系統よりDNAを抽出した。これを鋳型とし、テロメア-およびrDNA配列のプラーマ-を用いて、PCRを行った。その結果、特定染色体+特定のプライマーの組み合わせで、DNA断片の増幅が見られた。4.増幅断片をプラスミドベクターでクローニングした。複数のクローンを選び、DNA配列を決めた。5.切断点は、17SrRNA遺伝子内に起こっており、9bpの不明の塩基を挟んで30bpの逆位反復配列が存在した。テロメア-配列は、逆位配列内のTAGを認識して付加されていた。この逆位は、配偶子致死遺伝子で切断が起こった後に、姉妹染色分体間の融合と二動原体染色体の切断が起こったことを示していた。6.テロメア-配列は、基本的にはシロイヌナズナと同様なものであったが、独自の変異配列も見られた。7.他の系統においても同様な方法で切断点を解析して、配偶子致死遺伝子による染色体切断機構、および、テロメレースの性質について遺伝的に解明している。

1. 大量 1B 染色体缺失或其他异常纯合的小麦个体是由与小麦密切相关的种山羊草（Aegilops cylindrica）配子致死基因的作用产生的。 2.其中4株染色体异常，短臂髓部有断点。 3. 从这些品系以及 Endo 和 Gill 创建的四个品系中提取 DNA。使用此作为模板以及端粒和 rDNA 序列引物进行 PCR。结果，通过特定染色体和特定引物的组合扩增DNA片段。 4.将扩增片段克隆至质粒载体中。我们选择了多个克隆并确定了它们的 DNA 序列。 5.断点发生在17S rRNA基因内，有一个30bp的反向重复序列，两侧有9bp的未知碱基。通过识别反向序列中的 TAG 添加端粒序列。这种倒转表明配子致死基因的断裂之后是姐妹染色单体之间的融合和双着丝粒染色体的断裂。 6、端粒序列与拟南芥基本相似，但也观察到独特的突变序列。 7. 通过用类似的方法分析其他菌株的断裂点，我们从遗传学上阐明了配子致死基因和端粒酶特性引起的染色体断裂机制。