乳癌細胞におけるAnnexinIIの発現とその骨転移形成過程における意義

乳腺癌细胞中Annexin II的表达及其在骨转移形成过程中的意义

• 批准号: 07671167
• 负责人: 高橋 俊二
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07671167/
• 关键词: 骨転移; AnnexinII; 乳癌; 破骨細胞; 細胞接着; 骨吸収; 破骨細胞活性化因子; Annexin II

我々はヒト破骨細胞様細胞のcDNAライブラリーから破骨細胞形成を促進する因子としてAnnexinIIを同定した(J.Biol.Chem.269:28696,1994)。AnnexinIIは骨髄細胞からの破骨細胞形成を促進し骨吸収促進作用も示した。一方、従来細胞質内蛋白と考えられていたAnnexinIIがラット乳癌細胞を含む種々の細胞の細胞膜外に発現され、細胞外マトリックス、内皮細胞等への接着に関与していることも明らかになっている。そこで我々は乳癌細胞がAnnexinIIを発現して破骨細胞形成を促進し骨転移病巣の形成を促している可能性を検証するために以下の検討を進めた。1)乳癌細胞株がAnnexinIIを発現することを、mRNAレベル(AnnexinII cDNAによるNorthern blot)及び蛋白レベル(抗AnnexinII抗体によるWestern blot,Flowcytometry)で確認した。2)マウス乳癌細胞とマウス骨髄細胞の共存培養の系を確立し、AnnexinIIの発現と破骨細胞形成促進能の相関の検討を行い、さらにAnnexinIIのsense-,antisense-plasmidを乳癌細胞に導入したサブクローンを確立し、共存培養における破骨細胞形成促進能を検討した。マウス乳癌細胞MMT060562はサイトカイン非存在下で骨髄細胞による破骨細胞形成を促進するが、MMTにAnnexinIIを強発現させた細胞株は有意に強い破骨細胞形成刺激効果を示し、軽度AnnexinIIを抑制した細胞株は、破骨細胞形成促進が弱い傾向があった。更にin vivoでの骨転移形成能の検討を予定している。3)ヒト乳癌の臨床サンプルを集積し、乳癌原発巣でのAnnexinIImRNAの発現を確認し、乳癌原発巣および骨転移巣サンプルでのAnnexinII発現について免疫組織学的検討を行っている。

我们从人类破骨细胞样细胞的 cDNA 文库中鉴定出膜联蛋白 II 是促进破骨细胞形成的因子 (J. Biol. Chem. 269:28696, 1994)。膜联蛋白 II 促进骨髓细胞形成破骨细胞，并显示出骨吸收促进作用。另一方面，人们发现，以前被认为是胞浆内蛋白的膜联蛋白II在包括大鼠乳腺癌细胞在内的各种细胞的细胞膜外表达，并参与细胞外基质、内皮细胞的粘附。 ， ETC。 。因此，我们进行了以下研究来验证乳腺癌细胞表达Annexin II促进破骨细胞形成以及骨转移病灶形成的可能性。 1）我们确认乳腺癌细胞系在mRNA水平（使用Annexin II cDNA的Northern印迹）和蛋白质水平（使用抗Annexin II抗体的Western印迹，流式细胞术）表达Annexin II。 2）我们建立了小鼠乳腺癌细胞和小鼠骨髓细胞的共培养体系，研究了Annexin II表达与促进破骨细胞形成能力的相关性，并将Annexin II的正义和反义质粒引入乳腺癌细胞中我们建立了亚克隆并检查了它们在共培养中促进破骨细胞形成的能力。小鼠乳腺癌细胞MMT060562在没有细胞因子的情况下促进骨髓细胞的破骨细胞形成，但MMT强表达Annexin II的细胞系表现出明显更强的破骨细胞形成刺激作用，并且轻度抑制Annexin II的细胞系倾向于较弱促进。破骨细胞生成。此外，我们计划研究体内形成骨转移的能力。 3）我们正在采集人类乳腺癌的临床样本，确认原发性乳腺癌肿瘤中Annexin II mRNA的表达，并对原发性乳腺癌肿瘤和骨转移样本中Annexin II的表达进行免疫组织学检查。

项目成果

Shunji Takahashi 他: "Downregulation of Calcitonin Receptor in RNA Expression by Calcitonin during Human Osteoclast-like Cell Differentiation." Journal of Clinical Investigation. 95. 167-171 (1995)

Shunji Takahashi 等人：“人类破骨细胞样细胞分化过程中降钙素受体对 RNA 表达的下调”。临床研究杂志 95. 167-171 (1995)。

Shunji Takahashi他: "Development and Characterization of a Human Marrow Stromal Cell Line that Enhance Osteoclast-like Cell Formatin" Endocrinology. 136. 1441-1449 (1995)

Shunji Takahashi 等人：“增强破骨细胞样细胞形成的人骨髓基质细胞系的开发和表征”内分泌学 136. 1441-1449 (1995)

M.Koizumi, S.Takahashi他: "Bone Metabolic Markers in bone netastasis" J.Cancer Res.and Clinical Oncol.121. 542-548 (1995)

M.Koizumi、S.Takahashi 等人：“骨转移中的骨代谢标志物”J.Cancer Res.and Clinical Oncol.121 (1995)。