未分化胚性腫瘍細胞特異的転写調節因子の解析

未分化胚胎肿瘤细胞特异性转录调节因子的分析

基本信息

批准号：
07780669
负责人：
根岸文子
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Sasaki Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780669/
关键词：
胚性腫瘍細胞分化転写因子

项目摘要

未分化胚性腫瘍細胞特異的エンハンサーBOXDNAとその結合タンパク質の機能を明らかにするために以下の解析を行った。1.BOXDNA結合タンパク質の標的遺伝子(BOXF1)のクローニング未分化胚性腫瘍細胞F9のcDNAライブラリーから調整したcDNAをテンペレートとしBOXF1内に設定したオリゴマーとoligo(dT)をプライマーとして用いたPCR法を行った。残念ながら、BOXDNAを転写調節領域内に持つcDNAは得られなかったが、分化に伴って発現の減少するcDNAが得られた。塩基配列解析よりこのcDNAがマウスピルビン酸キナーゼM-2であることがわかった。ラットの初期胚や肝がん細胞でこの遺伝子の発現と未分化状態との関連性が報告されており、本研究はピルビン酸キナーゼM-2が未分化状態で広く働いていることを示唆するものと思われる。本研究の成果は、Biochmica et Biophysica Acta 1267(1995)135-138に報告した。2.BOXDNA結合タンパク質の精製未分化胚性腫瘍細胞P19細胞より、BOXDNA結合タンパク質の精製を試みた。得られた最終精製物が少量であったため充分な解析は行えなかったが、BOXDNA結合タンパク質の分子量が約45kDaであること、BOXDNA結合タンパク質複合体にはβ-アクチン様タンパク質が含まれることが示唆された。3.TEF-1ファミリーとの相同性を利用したBOXDNA結合タンパク質のクローニング BOXDNA結合タンパク質は、そのDNA結合配列の相同性から、TEF-1ファミリーであることが推測される。stringencyを下げたノーザン法を行ったところ、P19細胞の分化が進むにつれて新たなTEF-1ファミリーと推定されるバンドが検出された。現在、degenerateなプライマーを用いたPCR法により胚性腫瘍細胞に特異的なTEF-1ファミリーのクローニングを行っている。

进行了以下分析以阐明未分化的胚胎肿瘤细胞特异性增强子盒DNA及其结合蛋白的功能。 1。使用BoxF1和Oligo（DT）中的低聚物作为引物的靶基因（BoxF1）的克隆，使用从未分化的胚胎肿瘤细胞F9的cDNA库中制备的cDNA作为温带。不幸的是，未获得转录调节区域内含有boxDNA的cDNA，但通过分化获得了表达降低的cDNA。核苷酸序列分析表明，该cDNA是小鼠丙酮酸激酶M-2。已经报道了该基因的表达与早期大鼠胚胎和肝癌细胞中未分化状态之间的关联，这项研究似乎表明丙酮酸激酶M-2在未分化的状态下广泛活跃。这项研究的结果报道了Biochmica et Biophysica Acta 1267（1995）135-138。 2。尝试从未分化的胚胎肿瘤细胞的P19细胞中纯化BoxDNA结合蛋白的纯化。尽管无法进行足够的分析，因为获得的最终纯化产物很小，但BoxDNA结合蛋白的分子量约为45 kDa，BoxDNA结合蛋白复合物包含β-肌动蛋白样蛋白。 3。使用与TEF-1家族同源的克隆盒结合蛋白，假定BoxDNA结合蛋白基于其DNA结合序列的同源性在TEF-1家族中。当北部的方法以降低的严格度执行时，随着P19细胞变得更加区分，发现了一个新的频段，该频段被认为是一个新的TEF-1家族。目前，使用退化引物通过PCR克隆了特异性针对胚胎肿瘤细胞的TEF-1家族。