線維芽細胞成長因子および神経伝達物質が唾液腺細胞の分裂増殖に与える影響について

成纤维细胞生长因子和神经递质对唾液腺细胞分裂和增殖的影响

基本信息

批准号：
07771931
负责人：
各務秀明
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771931/
关键词：
唾液腺 3T3細胞細胞培養 FGF-2 VIP substanceP 神経伝達物質顎下腺

项目摘要

本研究では3T3細胞をfeeder layerとして用いることにより、ラット正常唾液腺細胞の選択的平面培養を確立した。培養唾液腺細胞は3T3細胞を排除しながら増殖し、コンフルエントになる段階でほぼ上皮細胞のみとなる。この細胞を継代し、以下の実験に用いた。培養された細胞はPAS染色、抗アミラーゼ抗体による免疫染色で陽性像を示し、透過型電子顕微鏡において分泌顆粒が認められた。培養細胞は形態学的に腺房細胞類似の性質を有していた。同様にヒト顎下腺細胞についても培養を行い、形態学的に類似の細胞を得ることができた。また、ラット唾液腺細胞に対するfura-2を用いた生理学的な検討では、カルバコールに対し単離唾液腺細胞と同様の反応性を示した。次にVIP、substancePがラット培養唾液腺細胞の増殖能に及ぼす影響について検討を行った。同細胞に対し、isoproterenolでは明らかな総細胞数の増加とBrdU陽性細胞の増加を示したのに対し、VIP、substancePでは有意な増殖の促進は認められなかった。ラット唾液腺細胞およびヒト顎下腺細胞を用いた実験で、FGF-2は培養4日目より有意に培養細胞の増殖を促進した。また、濃度による違いでは、100ngで最大の効果を示し、それ以上の濃度では一定となった。以上から、FGF-2においては直接唾液腺細胞に対し増殖促進に働くことが明らかとなり、将来萎縮した唾液腺に対する治療目的での投与の可能性が示された。一方、in vivoでは増殖促進作用が報告されているVIPやsubstancePにおいては、単独での直接の作用は無いかあるいはごく弱く、今後は他の生理活性物質との相互作用について解明すべきと考えられた。

在这项研究中，通过使用3T3细胞作为馈线层建立了正常唾液腺细胞的选择性平面培养物。培养的唾液腺细胞在消除3T3细胞的同时生长，在汇合阶段，它们几乎完全成为上皮细胞。将细胞转移并在以下实验中使用。培养的细胞通过抗淀粉酶抗体的PAS染色和免疫染色显示了阳性图像，并且在透射电子显微镜上观察到分泌颗粒。培养的细胞具有形态学上的腺泡细胞样特性。同样，培养人类下颌下腺细胞，并获得了形态上相似的细胞。此外，使用Fura-2对大鼠唾液腺细胞的生理研究表现出与卡尔巴乔尔对分离的唾液腺细胞的反应性相似。接下来，我们研究了VIP和底物对大鼠培养的唾液腺细胞增殖能力的影响。与同一细胞相反，异丙肾上腺素的总细胞计数明显增加和BRDU阳性细胞的增加，而vip和substrateP却没有明显的促进增殖。在使用大鼠唾液腺细胞和人类下颌细胞的实验中，FGF-2显着促进了培养的第四天培养细胞的增殖。此外，浓度的差异在100 ng时显示出最大的作用，并且在较高浓度下保持恒定。从上面的角度来看，FGF-2直接促进对唾液腺细胞的增殖，表明将来萎缩性唾液腺施用的可能性是为了治疗的目的。另一方面，据报道促进体内生长的VIP和物质不会对自己的生长或直接影响，或者它们非常弱，并且认为将来应澄清与其他生理活性物质的相互作用。