軟骨組織のペルオキシソーム

软骨组织中的过氧化物酶体

基本信息

批准号：
07771667
负责人：
櫻庭春彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.軟骨組織のペルオキシソームの機能動物では典型的なペルオキシソームは肝臓と腎臓にだけ存在しており、これ以外の組織には肝・腎のペルオキシソームより小型であるがカタラーゼを含むマイクロペルオキシソームが存在すると言われている。本研究ではまず成長軟骨細胞におけるペルオキシソームの存在を明らかにするためにカタラーゼ活性を持つオルガネラの検索を行った。ニワトリ関節軟骨の成長軟骨層をコラゲナーゼ処理し、軟骨細胞画分を得た後、分画遠心法によりカタラーゼ活性を持つオルガネラを単離した。このオルガネラを、しょ糖密度勾配遠心法で分画したところ、肝臓のペルオキシソームとほぼ同一の沈降密度を持つペルオキシソームが存在することが明らかとなった。ペルオキシソームに存在する唯一のトランスアミナーゼであるalanine:glyoxylate aminotransferase(AGT)の活性は、肝臓ペルオキシソームでは高かったが、成長軟骨細胞のペルオキシソームではほとんど検出されなかった。このことは、成長軟骨細胞のペルオキシソームがアミノ酸代謝、グリオキシル酸代謝に関して肝臓ペルオキシソームと異なる機能を持つことを示す。2.成長軟骨細胞のペルオキシソームの形態・分布ニワトリ関節軟骨の成長軟骨細胞のペルオキシソームに存在するカタラーゼと免疫学的にクロスリアクトする抗体の検索を行ったところ、抗ウシ肝臓カタラーゼ抗体が最も強力に反応した。現在、本抗体とプロテインAゴールドを用いた免疫組織学的手法により、ニワトリ成長軟骨細胞に存在するペルオキシソームの形態・分布を検討中である。従来、肝・腎にしか存在しないと言われてきた大型のペルオキシソームが成長軟骨細胞に存在するか否か興味深い。

1.过氧化物酶体在软骨组织中的功能在动物中，典型的过氧化物酶体仅存在于肝脏和肾脏中，而比肝脏和肾脏中的过氧化物酶体小但含有过氧化氢酶的微过氧化物酶体则存在于其他组织中。在这项研究中，我们首先寻找具有过氧化氢酶活性的细胞器，以阐明生长中的软骨细胞中过氧化物酶体的存在。用胶原酶处理鸡关节软骨生长的软骨层，获得软骨细胞级分，然后通过差速离心分离具有过氧化氢酶活性的细胞器。通过蔗糖密度梯度离心分离该细胞器揭示了过氧化物酶体的存在，其沉降密度几乎与肝脏过氧化物酶体的沉降密度相同。丙氨酸：乙醛酸转氨酶（AGT）是过氧化物酶体中唯一存在的转氨酶，其活性在肝脏过氧化物酶体中很高，但在生长的软骨细胞的过氧化物酶体中几乎检测不到。这表明生长中的软骨细胞中的过氧化物酶体在氨基酸代谢和乙醛酸代谢方面具有与肝脏过氧化物酶体不同的功能。 2.生长的软骨细胞中过氧化物酶体的形态和分布在寻找与鸡关节软骨生长的软骨细胞中过氧化物酶体中存在的过氧化氢酶发生免疫交叉反应的抗体时，抗牛肝过氧化氢酶抗体表现出最强的反应。我们目前正在使用这种抗体和蛋白 A 金，通过免疫组织学方法研究生长鸡软骨细胞中存在的过氧化物酶体的形态和分布。有趣的是，传统上被认为仅存在于肝脏和肾脏中的大过氧化物酶体是否存在于生长中的软骨细胞中。