Induction of transplantation tolerance based on lymphocyte apoptosis

基于淋巴细胞凋亡诱导移植耐受

基本信息

批准号：
07457265
负责人：
SUZUKI Seiichi
金额：
$ 4.42万
依托单位：
National Children's Medical Research Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07457265/
关键词：
FTY720 Lsaria sinclairii Apoptosis Organ Transplantation Rate Dogs cyclosporin Fas lpr-マウス Isaria sinclairii イヌシクロスポリン Fas ISP-1 心移植

项目摘要

我々はこれまでに、新規免疫抑制物質FTY720はリンパ球にアポトーシスを誘導することにより拒絶反応の予防効果を発現することを明らかにしてきた。この薬剤を用いることにより、ラットの心、肝、腎、小腸移植で生着延長効果を認めた。また、イヌ腎移植でも有効であり、さらにシクロスポリン(CsA)やタクロリムス(FK506)とも相乗的な効果のあることを認めた。本年度は最終年度であり、遺伝子導入とFTY720を用いたリンパ球特異的で強力なアポトーシス誘導を行い、安全で効果的な免疫寛容誘導の研究をすすめた。すなわち、Fasリガンド(L)遺伝子を組み込んだプラスミド(pFasL)をリポソーム膜に包埋し、その外側に不活性化した細胞隔合能を持つセンダイウイルス(HVJ)を結合させベクター(HVJリポソーム)として用いた。pFasL-HVJリポソームをドナーラットの門脈から肝臓に注入し、3日後に同種レシピエントに肝移植を行った。その結果、対照に比較して著明な生着延長が得られ、最高で42日間の生存が認められた。浸潤した活性化Tリンパ球に対してアポトーシスが誘導されていることがR73とTUNEL法による二重染色で明らかにされている。この方法だと、肝に於けるFasL蛋白質の発現率は10〜20%程度であり、また発現期間も1月位で、免疫寛容を誘導するには不十分である。そこで、攻撃してくるリンパ球を減少させることにより、FasL遺伝子発現の効果を高めてやる目的で、移植前2日間(前日と当日術前)だけFTY720を5mg/Kg投与したところ、さらに著明な生着延長効果が得られるとともに50%で100日以上の永久生存が可能となった。今後は更に高率に免疫寛容を誘導させるためにFasLの発現率の向上を目指しているが、FasLを多量に発現させると移植肝に対して激症肝炎を引き起こすことを認めている。それは発現したFasLがMatrix metaloproteinase(MMP)により遊離型となり、それが好中球を呼び寄せるためであることが明らかにされている。そこで、一つには、遺伝子導入とともにMMPインヒビターを用いること、あるいは遊離型とならない膜結合型のFasLcDNAを作成し、それを導入することなどを中心に研究を進めている。本研究の結論として、FTY720の移植前投与と移植臓器へのFasL遺伝子導入により、リンパ球特異的かつ強力にアポトーシスを誘導させることがてき、生体には副作用がなく安全に免疫寛容を成立させうることが明らかにされた。

我们已经透露，新的免疫抑制物质FTY720诱导淋巴细胞凋亡以防止排斥。通过使用这种药物，RAW的延伸被大鼠的心脏，肝脏，肾脏和小肠移植所认识到。他还承认，它在狗肾移植中有效，并且具有环孢霉素（CSA）和Taklorimus（FK506）的协同作用。今年是最后一年，我们通过基因引入和使用FTY720的淋巴细胞特异性和强大的凋亡指导提倡安全有效的免疫耐受性指导。也就是说，掺入FAS配体（L）基因的质粒（PFASL）被包裹在脂肪切开膜中，而具有基于细胞的细胞的仙台病毒（HVJ）合并为外部和载体（HVJ）（HVJ）脂质）。 PFASL-HVJ脂质体从Donorat门户静脉注入肝脏，并在同一受体上对肝移植进行。结果，与对比度相比，获得了原始磨损的显着延伸，并观察到长达42天的存活。 R73和R73的染色染料和TUNEL方法揭示了凋亡被诱导的T -lymphocytes。在这种方法中，肝脏中FASL蛋白的表达速率约为10％至20％，表达周期大约是一月，这还不足以诱导免疫力。因此，为了通过减少攻击淋巴细胞来增加FASL基因表达的影响，仅在移植前两天（前一天和手术前一天），将FTY720用于5 mg/kg。现场磨损，可以以50％的速度生存超过100天。将来，目的是提高FASL的表达速率，以便进一步诱导较高速率的免疫耐受性，但它承认表达大量FASL会导致移植肝脏肝炎。已经揭示了表达的FASL是基质金属蛋白酶（MMP）的游离类型，该类型是吸引中性的。在一个中，我们正在进行研究，重点是使用遗传引入并使用MMP抑制剂，创建薄膜型faslcDNA，该薄膜不是免费类型并引入它。作为这项研究的结论，可以在没有副作用的情况下保护免疫耐受性，而淋巴细胞特异性和强大的FTY720诱导以及将FASL基因引入移植器官揭示。