Mannose-binding proteinの悪性脳腫瘍治療への応用

甘露糖结合蛋白在恶性脑肿瘤治疗中的应用

基本信息

批准号：
06857091
负责人：
藤田隆史
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857091/
关键词：
Gliomz Complement Mannose-binding protein Lectin pathway Complement regulatory factor

项目摘要

【方法】・ヒトグリオーマ株細胞へのMBPの結合:6種類のヒトグリオーマ株細胞を用い、MBPの結合をflow cytometryにて検討した。・MASPの結合:腫瘍細胞に結合したMBPへのMASPの反応性を^<125>Iを標識したMASP(以外^<125>I-MASP)を用いて検討した。・C4の活性化:溶血反応を利用した消費試験にて検討した。腫瘍細胞に種々の濃度のMBP-MASP complex(以下MBP-MASP)を反応させ洗浄後、C4を加えその上清中の残存C4活性をEA・C4Dを用いた溶血試験にて測定した。・C3の活性化:C4消費試験とほぼ同様に、腫瘍細胞にMBP^MASP・C4・C2を反応させた後、C3を加えて上清中の残存C3活性をEAC14・C5・C6-9Rを用いた溶血試験にて測定した。・グリオーマ株細胞における補体抑制因子の発現:DAFおよびHRF20の腫瘍細胞における発現を、各々に特異的なモノクロナル抗体(1C6・1F5)を用いてflow cytometryにて検討した。【結果】検討した6種類全てのグリオーマ株細胞においてMBPの結合が認められ、その結合は糖に対して特異的で且つMBPの濃度に依存していた。^<125>I-MASPはMBPを反応させたグリオーマ株細胞で有意に高い結合性を示した。C4・C3の消費試験は2種類の株細胞で行なったが、C4は両者で消費が認められたのに対し、C3では一方でのみ確認された。そこでグリオーマ細胞上における補体制御因子の発現を検討したところ、腫瘍細胞の種類によって差があるものの発現が認められた。【結論】本研究でヒトグリオーマ株細胞におけるMBPの結合及びリクチン経路によるC3までの補体の活性化が確認された。またグリオーマ株細胞において補体制御因子の発現が認められたことから、生体内グリオーマ細胞においても自己補体からの防御機構が保たれている可能性が示唆された。今後はレクチン経路の補体活性化による殺細胞作用及びオプソニン効果を検討したいと考えているが、これらの防御因子への対応も必要であると考えられた。

方法：MBP与人神经胶质瘤线细胞的结合：使用流式细胞仪使用六种类型的人神经胶质瘤线细胞研究MBP的结合。 MASP结合：使用标记为 ^<125> i（ ^<125> i-MASP除外）的MASP研究了MASP与MBP与肿瘤细胞结合的反应性。 - C4的激活：在使用溶血反应的消费测试中对此进行了研究。将肿瘤细胞与各种浓度的MBP-MASP复合物（以下称为MBP-MASP）反应，并洗涤，将C4添加到肿瘤细胞中，并使用EA和C4D通过溶血测试来测量上清液中其余的C4活性。 - C3的激活：几乎与C4消耗试验中的方式相同，将肿瘤细胞与MBP^MASP，C4和C2反应，并将C3添加到肿瘤细胞中，并使用EAC14，C5和C6-9R在溶解测试中测量上清液中的剩余C3活性。 - 胶质瘤细胞系中补体抑制剂的表达：通过使用针对每种特异的单克隆抗体（1C6，1F5），通过流式细胞仪检查DAF和HRF20在肿瘤细胞中的表达。 [结果]在检查的所有六种类型的神经胶质瘤品系中都观察到MBP结合，并且结合特异于糖，并取决于MBP的浓度。 ^<125> i-MASP在与MBP反应的神经胶质瘤线细胞中显示出明显更高的结合特性。在两种类型的细胞系上进行了C4和C3的消耗测试，并且观察到C4两者都消耗，而C3仅在一个中证实。因此，当我们检查胶质瘤细胞上补体调节因子的表达时，我们发现表达取决于肿瘤细胞的类型。 [结论]这项研究证实了Mbps的结合和人神经胶质瘤线细胞中Lictin途径的补体至上的激活。此外，在神经胶质瘤细胞中观察到补体调节因子的表达，这表明体内神经胶质瘤细胞中的防御机制保持在体内。将来，我们想研究凝集素途径补体激活的细胞杀伤和反素效应，但是人们认为有必要解决这些保护因素。