低温花芽誘導過程に特異的に発現する遺伝子の解析

低温花芽诱导过程中特异表达基因分析

基本信息

批准号：
06760004
负责人：
鳥山欽哉
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760004/
关键词：
花芽誘導茎頂部転写因子遺伝子クローニング Brassica campestris

项目摘要

Brassiacacampestrisの品種おそめに低温処理(5℃,8時間日長)を行い花芽の分化を誘導した。花序の分化が始まる低温処理6週間目の茎頂部からcDNAライブラリーを作製し、完全展開葉のpoly(A)^+RNAを用いてサブトラクションを行った。続いて、低温花芽誘導特異性を確認するため、花芽分化の進んだ低温処理12週間目の茎頂部と低温処理前の完全展開葉のそれぞれのpoly(A)^+RNAをプローブとして用い、ディファレンシャルスクリーニングを行った。その結果、花芽分化誘導期に強く発現する13クローンを単離した。この13クローンについての塩基配列を決定し、相同性検索を行った。その結果、10クローンについては既知の遺伝子と相同性を示した。3クローン(FTA1-04,2-27,2-46)については既知の遺伝子との相同性は低かった。既知の遺伝子と相同性の高かったクローン群に転写因子としての機能を有すると考えられるクローン(FTA1-09)が存在し、TATbindingprotein様遺伝子であることが推定された。このクローンについてはB.campestrisS9系統の小胞子期の葯cDNAライブラリーから全長と推定されるcDNAを単離した。このFTA1-09クローンと、既知の遺伝子と相同性の低かった3クローン(FTA1-04,FTA2-27,FTA2-46)についての発現様式を確認するためにノーザンハイブリダイゼーション分析を行った。その結果、FTA1-04クローンについては花芽分化誘導時における発現を確認することはできなかったが、FTA 2-27,FTA2-46クローンについては低温処理12週間目の花芽の発達が進んだステージにおいて強い発現を認めた。また、FTA1-09クローンについても花序の発達が進んだステージに強い発現が認められ、さらに、葯においても強い発現が認められた。

低温（5℃，8小时光周期）处理油菜Osome诱导花芽分化。低温处理6周后，当花序分化开始时，从茎尖制备cDNA文库，并使用来自完全展开的叶子的poly(A)^+RNA进行扣除。接下来，为了确认低温花芽诱导的特异性，我们使用poly(A)^+RNA作为探针，从低温处理12周后花芽分化已经进展的芽尖处开始，从完全成熟的花芽分化开始。低温处理前展开叶片，并采用差速筛选。结果，分离出13个在花芽分化诱导期强表达的克隆。确定了这 13 个克隆的核苷酸序列并进行了同源性搜索。结果，10个克隆显示出与已知基因的同源性。三个克隆（FTA1-04、2-27、2-46）与已知基因的同源性较低。在与已知基因具有高度同源性的克隆中，有一个克隆(FTA1-09)被认为具有转录因子的功能，并且被推测为TAT结合蛋白样基因。关于该克隆，从B.campestris S9株的小孢子阶段的花药cDNA文库中分离出估计为全长的cDNA。进行Northern杂交分析以确认该FTA1-09克隆和与已知基因具有低同源性的三个克隆（FTA1-04、FTA2-27、FTA2-46）的表达模式。结果，我们无法确认诱导花芽分化时FTA1-04克隆的表达，但在诱导花芽分化12周后观察到FTA 2-27和FTA2-46克隆在花芽发育后期的表达。低温处理观察到强表达。另外，对于FTA1-09克隆，在花序发育后期观察到强表达，并且在花药中也观察到强表达。