二つのプロモーターの比較による心筋と骨格筋の転写活性化機構の違いについての解析

通过比较两个启动子分析心肌和骨骼肌转录激活机制的差异

• 批准号: 06780573
• 负责人: 日高 京子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780573/
• 关键词: 心筋; 転写因子; MEF2; P19細胞

我々はすでにアルドラーゼとホスホグリセロムターゼ遺伝子のキメラプロモーターを作製し、MEF-2コンセンサス配列の違いだけでも心筋・骨格筋での特異性に差が生じるような予備的なデータを得た。このことはMEF-2転写因子のサブタイプの違いで心筋と骨格筋の特異性が決ることを示唆する。MEF-2はヒトにおいて少なくとも4つの遺伝子がクローニングされているが、心筋特異的な発現パターンを示すものは特にまだ知られていない。そこで心筋特異的MEF-2、あるいは心筋の発生に関わるようなMEF-2遺伝子の単離をめざして次のような実験を計画した。1)MEF-2遺伝子の保存された領域を基にしてmixed oligonucleotideを合成し、PCRを行い新たなMEF-2遺伝子のクローニングを試みる。2)クローニングした遺伝子の発現パターンを調べる。3)in vitroで心筋様の形態に分化する細胞株(P19)を用いて、クローニングした遺伝子の心筋発生における役割を調べる。未分化胚細胞P19をDMSOで分化誘導し、0日目、6日間の細胞RNAを分離し、それをテンプレートにしてMOPAC(mixed oligonucleotide primed amplification cloning),RT-PCR、クローニングおよびシーケンスを行なった。その結果、従来のMEF2A,MEF2D以外にMEF2B′遺伝子が得られた。この遺伝子はF9,ES,P19細胞などの未分化型で発現し、分化型では発現が減少していることがわかった。成体組織(肝、心、筋、腎、脳、肺)ではほとんど発現なく、胸腺、脾、精巣でわずかに発現していた。このことは新しいMEF2B′は従来の分化型のMEF2と比較して異なった役割を担っているものと考えられる。

我们已经为藻酶和磷酸甘油酶基因创建了嵌合启动子，并且获得了初步数据，由于MEF-2共有序列的差异，仅在心肌和骨骼肌的特异性方面有所不同。这表明MEF-2转录因子亚型的差异决定了心肌和骨骼肌的特异性。尽管至少有四个基因被克隆在人类中，但尚未表现出心肌特异性表达模式。因此，计划设计以下实验，以隔离涉及心肌发展的心肌特异性MEF-2或MEF-2基因。 1）基于MEF-2基因的保守区域的合成混合寡核苷酸，PCR被执行以尝试克隆新的MEF-2基因。 2）检查克隆基因的表达模式。 3）使用细胞系（p19）检查克隆基因在心肌发育中的作用，这些细胞系在体外分化为心肌样形态。通过与DMSO的分化诱导未分化的生殖细胞p19，并在第0天分离细胞RNA 6天，然后用作MOPAC的模板（混合寡核苷酸引发的放大克隆），RT-PCR，克隆和测序。结果，除了传统的MEF2A和MEF2D外，还获得了MEF2B的基因。该基因以未分化的形式（例如F9，ES和P19细胞）表达，发现表达以分化形式降低。它在成人组织（肝脏，心脏，肌肉，肾脏，脑，肺）中几乎不表达，并在胸腺，脾和睾丸中表达。这表明，与传统的差异化MEF2相比，新的MEF2B'起着不同的作用。