酸化ストレスにより生成する過酸化リン脂質の血管病変における役割

氧化应激产生的磷脂过氧化物在血管病变中的作用

基本信息

批准号：
06772151
负责人：
唐澤健
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772151/
关键词：
PAF 酸化リン脂質動脈硬化 PAF-アセチルヒドロラーゼ

项目摘要

本研究では、酸化ストレスにより産生されるPAF様酸化リン脂質の同定を行い、これらの酸化リン脂質の動脈硬化症をはじめとする血管病変における役割を明らかにすることを目的とした。まず、我々が既に作製した抗PAF抗体を用いて動脈硬化症患者より調整された病理標本を免疫組織化学的に解析した結果、動脈硬化巣の脂質蓄積部位が染色されることが示された。従って、動脈硬化巣にはPAFもしくはPAF様生理活性を示すリン脂質が蓄積している可能性が考えられる。更に、これらの酸化リン脂質の構造を明らかにし、その定量法を開発するために、SuccinoylPAFに対する抗体を作製しようと試みた。SuccinoylPAFに対する抗体を作製するための抗原を合成するにあたり、抗PAF抗体の場合と同じように、グリセロール1位のアルキル鎖末端にキャリアータンパク質との結合を可能にする官応基を導入しようとしたが、グリセロール2位のSuccinoyl基には遊離カルボキシル基が存在するため、目的の化合物を合成することは困難であった。そこで、このカルボキシル基を利用して、牛血清アルブミンと結合させた人工抗原を用いて、得られたウサギ抗血清の反応特異性を調べたところ、SuccinoylPAF以外のコリンリン脂質との交差反応性が観察され、SuccinoylPAFの化学構造が認識されていないことが分かった。今後、この酸化リン脂質に対する特異的抗体を得るための抗原を分子設計する際には、グリセロール2位のカルボキシル基を遊離状態にしておく必要があると思われた。一方、酸化リン脂質の代謝調節機構を明らかにするために、酸化リン脂質の分解酵素である血漿PAFアセチルハイドロラーゼの構造解析を実施した。既に、我々はモルモット血清よりこの酵素を単一に精製することに成功しているが、リジンエンドペプチダーゼ処理によって得られたペプチドフラグメントのアミノ酸配列を数カ所明らかにすることができた。現在、これらの部分アミノ酸配列を基に合成したオリゴDNAをPCRプライマーに用いて、cDNAクローニングを行っている。

在本研究中，我们的目的是鉴定氧化应激产生的 PAF 样氧化磷脂，并阐明这些氧化磷脂在包括动脉硬化在内的血管病变中的作用。首先，使用我们已经制备的抗PAF抗体对从动脉硬化患者制备的病理标本进行免疫组织化学分析，结果显示动脉硬化病变中的脂质积累位点被染色。因此，PAF或表现出PAF样生理活性的磷脂可能在动脉硬化病变中积聚。此外，为了阐明这些氧化磷脂的结构并开发定量它们的方法，我们尝试生成针对 SuccinoylPAF 的抗体。当合成用于产生抗琥珀酰PAF抗体的抗原时，我们尝试在甘油1位的烷基链末端引入官能团，以能够与载体蛋白结合，就像抗PAF抗体的情况一样。甘油2位琥珀酰基含有游离羧基，难以合成所需化合物。因此，当我们研究使用该羧基与牛血清白蛋白结合的人工抗原获得的兔抗血清的反应特异性时，我们观察到与琥珀酰PAF以外的胆碱磷脂的交叉反应性，发现琥珀酰PAF的化学结构不具有交叉反应性。认可。将来，当设计抗原以获得针对这种氧化磷脂的特异性抗体时，需要将甘油2位上的羧基保留为游离状态。另一方面，为了阐明氧化磷脂的代谢调节机制，我们对血浆PAF乙酰水解酶（一种降解氧化磷脂的酶）进行了结构分析。我们已经成功地从豚鼠血清中纯化了这种酶的单一版本，并且能够澄清通过赖氨酸内肽酶处理获得的几个肽片段的氨基酸序列。目前，使用基于这些部分氨基酸序列合成的寡DNA作为PCR引物进行cDNA克隆。