麻酔薬の作用機序に関する分子生物学的研究

麻醉药作用机制的分子生物学研究

• 批准号: 06771228
• 负责人: 曽我 広太
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771228/
• 关键词: PC12pheochromocytoma細胞; Spodoptera frugiperda21細胞; Vero細胞; 麻酔薬; totalRNA; 血清刺激; NGF; ノーザンブロット

1)まず各種細胞を用いて麻酔薬添加による形態学的な変化を調べた。PC12pheochromocytoma細胞、Spodoptera frugiperda21細胞、Vero細胞の培養上清に、静脈麻酔薬pentobarbital、脊椎麻酔薬tetracaineをそれぞれ臨床有効濃度と考えられる量50μM、100μMを加えてみたが、正常細胞と比し変化は見られなかった。更に1μMから1mMへと濃度を変化させたが形態学的な変化は見られなかった。次に細胞からグアニジン法にてtotalRNAを抽出し、その発現量の差を比較しようとしたが、回収率が一定ではなく有為な結果は未だ得られていない。同様に吸入麻酔薬であるHalothane、Isoflurane、Enfluraneにおいても引き続き実験を行っている。2)PC12pheochromocytoma細胞においてその培養上清に50μM pentobarbitalを加え、24、48、72時間後にtotalRNAを抽出し、fos、junのDNAプローブを用いてノーザンブロットを行った。次に血清刺激試験を行った。細胞を4時間無血清培地で処理をし、その後血清を添加し24、48、72時間後にtotalRNAを抽出、同様にノーザンブロットを行った。いずれの実験においてもこ経時的変化では有為な差は認められていない。24時間以内での短時間での経時的変化を追う必要があると考えている。またNGF(Nerve Growth Factor)を50ng/ml添加し、同様の実験を行った。NGF添加後一週間では形態学的にPC12細胞の分化は抑制される様に見えるが、神経線維の伸長度では統計学的に有為ではない。fos、junの発現は抑制される傾向が見られ、更に再現性について実験を継続している。pentobarbital前投与ではこの変化は見られないため、pentobarbitalが、直接NGFの情報伝達系に作用することが推定された。今後は、麻酔薬の濃度による変化や、他の種類の麻酔薬、吸入麻酔薬など、を用いた実験も行いたいと考えている。

1）首先，使用各种细胞检查由麻醉药添加引起的形态变化。我们在PC12Pheochromocytomapomocytomay细胞的培养上清液中添加了50μM和100μM的静脉麻醉五体和脊髓麻醉四甲酸，Spodoptera frugiperda21细胞和VERO细胞分别与临床有效的浓度相比，与临床有效的浓度相比，spodoptera frugiperda21细胞和VERO细胞分别是正常的。此外，浓度从1μm更改为1 mm，但未观察到形态学变化。接下来，使用鸟嘌呤方法从细胞中提取总RNA，并比较了表达水平的差异，但恢复率并不恒定，尚未获得有效的结果。同样，通过吸入麻醉药，异氟烷和Enflurane继续实验。 2）将50μM戊巴比妥添加到PC12嗜铬细胞瘤细胞中的培养上清液中，在24、48和72小时后提取总RNA，然后使用FOS和JUN Serum刺激测试的DNA探针进行北印迹。将细胞用无血清培养基处理4小时，然后加入血清，在24、48和72小时后提取总RNA，并以相同的方式进行北印迹。随着时间的流逝，任何实验均未观察到显着差异。我们认为，有必要在24小时内短时间内跟踪随时间的变化。此外，还增加了50 ng/mL的NGF（神经生长因子），并进行了相同的实验。尽管加入NGF一周后，PC12细胞的分化似乎在形态上抑制了，但它在神经纤维的伸长率上没有统计学上有效。 FOS和JUN的表达趋势被抑制，并且实验继续可再现结果。由于未在五叶底毛的预处理前观察到这种变化，因此假定五脑骨质直接在NGF信号系统上作用。将来，我们希望使用更改进行实验，具体取决于麻醉药的浓度，其他类型的麻醉药和吸入麻醉药。