損傷脊髄の再生におけるサイトカインと生物活性分子NOの機能に関する基礎的研究

细胞因子和生物活性分子NO在损伤脊髓再生中的作用基础研究

• 批准号: 06771067
• 负责人: 長谷川 光広
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771067/
• 关键词: Spinal cord iniury; regenevation; NO

若年雌ウイスターラット(3-5週令)を用いて,損傷脊髄モデルならびに損傷脊髄の神経再生モデルを作成した。手術顕微鏡下に下位胸椎レベルに椎弓切除を加えたのちに硬膜越しに片側脊髄を圧挫し脊髄損傷を作成した(損傷モデル)。自家末梢神経移植組織として約10mm長の坐骨神経を取り出し,損傷部の上位,下位の灰白質にそれぞれ移植神経の上端下端を挿入し,脊髄損傷部位の中枢側と末梢側を架橋する組織とした(再生モデル)。両群ともに手術翌日(1日),3日,1,2,3,5,8,13週までの時期にパラフォルムアルデヒドで経心的に灌流固定したのち移植片を含む脊髄を取り出し,免疫組織化学的手法により,bFGF,IL-1の発現と局在を経時的に免疫電顕を含め詳細に検討した。細胞の同定に抗GFAP(反応性アストログリア),抗ED1(マイクログリア,マクロファージ),UCHL1(T cell),L-26(B cel),抗MHC class II(抗原提示細胞),抗S-100(Schwann細胞),抗ニューロフィラメント(再生軸票)を用いた。再生早期からbFGFが損傷周囲と移植組織に強陽性に検出され,損傷周囲と移植神経組織内に抗ED1陽性のマクロファージが多数集積していた。損傷モデルを損傷後1-日から慢性期に到るまでの期間で,麻酔導入後速やかに未固定のまま脊髄を損傷部を含めて摘出し,損傷部,中枢端,末梢端をそれぞれ10mmづつ凍結保存したのち,NOS活性を組織定量した.損傷部脊髄はコントロールとした正常脊髄に比べ4倍の活性を示した。現在も実験は継続中であり,解析総括ののち学会発表ならびに論文発表をする予定である。

使用年轻雌性Wistar大鼠（3-5周龄）创建损伤脊髓模型和损伤​​脊髓神经再生模型。在手术显微镜下进行下胸椎椎板切除术后，一侧脊髓被硬脑膜压碎，形成脊髓损伤（损伤模型）。取出约10mm长的坐骨神经作为自体周围神经移植组织，将移植神经的上、下端分别插入损伤部位的上、下灰质，形成桥接中枢神经的组织。和脊髓损伤部位的外周侧（复制模型）。两组均于术后第1天、第1天、第1周、第2周、第3周、第5周、第8周、第13周经多聚甲醛经心灌注固定后取出含有移植物的脊髓。移植物被移除并免疫 随着时间的推移，使用组织化学技术（包括免疫电子显微镜）详细检查 bFGF 和 IL-1 的表达和定位。用于细胞鉴定，抗 GFAP（反应性星形胶质细胞）、抗 ED1（小胶质细胞、巨噬细胞）、UCHL1（T 细胞）、L-26（B 细胞）、抗 MHC II 类（抗原呈递细胞）、抗 S使用-100（雪旺细胞）和抗神经丝（再生轴突）。从再生早期开始，损伤周围和移植组织中就强烈检测到bFGF，并且损伤周围和移植神经组织中积累了大量抗ED1阳性巨噬细胞。在损伤模型中，从损伤后1天到慢性期，在麻醉诱导后立即将包括损伤部分的脊髓去除而不固定，并且将损伤部分、中央端和远端各10mm去除冷冻保存后，对组织中的 NOS 活性进行定量。与用作对照的正常脊髓相比，受伤的脊髓显示出四倍的活性。实验仍在进行中，我们计划在完成分析后在学术会议和论文中展示结果。