癌遺伝子C-metの腎疾患への関与の解明

阐明癌基因 C-met 与肾脏疾病的关系

• 批准号: 05770830
• 负责人: 石橋 賢一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770830/
• 关键词: C-met; 肝細胞増殖因子; MDCK細胞; CAMP; forskolin; PMA; 片腎摘; ノーザンブロット法

この研究の目的は、肝細胞増殖因子(HGF)の腎臓への作用をみるために、その受容体であるC-metの動行を腎臓で調べることにあった。C-metの発現の調節をみるためにin vitro系を利用した。イヌの尿細管細胞のcell lineであるMDCK細胞はHGFによってその遊走が亢められ、またコラーゲンゲル内でHGFによって管腔形成をすることが知られており、C-metの研究にはよい系と考えられた。我々が以前、ラット腎臓でのC-met発現を調べるためにクローニングしたラットのC-met(BBRC187:1454)を用いてノーザンブロット法でC-metの発現を検討したところ、MDCK細胞では7Kbと9Kbの2つのバンドがみとめられた。8-bromo-cAMP(1mM)やforskolin(50muM)でC-metの発現は増加したが、PMA(0.1muM)で抑制された(いずれも6時間以内)。これはC-metの発現がPKAやPKCによるリン酸化反応で調節されていることを示唆している。一方、細胞間隙を疎にするために短時間のトリプシン処理をおこなうと6時間後にC-metの発現は増加した。また、片腎摘でC-metの発現が6時間以内に増加することを報告したが(BBRC187:1454)これが同時に増加するHGFによるかどうかを見る目的でHGF(5ng/g体重)を正常ラットに腹腔内投与したが、C-metの発現に変化をみとめなかった。よってリガンドであるHGF以外の作用で片腎摘時にC-metが増加すると考えられる。

这项研究的目的是研究C-MET受体的行为，以查看肝细胞生长因子（HGF）对肾脏的影响。使用体外系统来确定C-MET表达的调节。已知MDCK细胞是犬管细胞的细胞系，可以增强HGF的迁移，并通过HGF在胶原蛋白凝胶中形成流明，这被认为是C-MET研究的良好系统。我们先前使用大鼠C-MET（BBRC187：1454）通过北印迹检查了C-MET的表达，以检查大鼠肾脏中的C-Met表达，并在MDCK细胞中发现了两个频带，7 kb和9 kb。 C-MET表达用8-溴训练营（1 mm）和福斯科蛋白（50 MUM）增加，但被PMA（0.1 MUM）抑制（均在6小时内）。这表明C-MET表达受PKA和PKC的磷酸化反应调节。另一方面，进行简短的胰蛋白酶化以稀疏细胞间隙，并且6小时后C-MET表达增加。我们还报道说，在单次肾切除术（BBRC187：1454）中，C-MET表达在6小时内增加，并且要查看这是否是由于HGF的同时增加，HGF，HGF（5NG/G体重）（5NG/G体重）对正常大鼠进行了腹膜内施用，但在C-MET表达中未观察到变化。因此，人们认为，由于配体HGF以外的作用，C-MET在单次切除术期间增加。