Apoptosisを抑制するbcl-2遺伝子導入ヒト癌細胞の抗癌剤耐性誘導機構

导入抑制细胞凋亡的bcl-2基因的人类癌细胞诱导抗癌药物耐药性的机制

• 批准号: 05770338
• 负责人: 西尾 和人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770338/
• 关键词: アポトーシス; bcl-2; 抗癌剤

bcl-2遺伝子をネオマイシン耐性遺伝子を含むベクターに組み込み、ヒト小細胞肺癌細胞株SBC-3にリポフェクション法により遺伝子移入し、ネオマイシンによるセレクションによりSBC-3/Bcl-2を得た。SBC-3/Bcl-2細胞の各種抗癌剤に対する感受性の変化をMTT法により検討したところ、親株であるSBC-3細胞をcisplatin、etoposide、ACNU、adriamycin、methotrxate、CPT-11、taxol、mitomycin C に接触させることにより、アポトーシスの指標であるDNAのフラグメンテーションが観察された。SBC-3/Bcl-2はこのうちのadriamycin、CPT-11、mitomycin Cに対しSBC-3細胞と比較してそれぞれ3.4、7.6、5.7倍の耐性を示した。その他の薬剤に対しては耐性を示さなかった。さらにトランスフェクタントが耐性を獲得した薬剤において親株でDNAフラグメンテーションが認められる濃度の薬剤ではSBC-3/Bcl-2ではDNAフラグメンテーションが認められなかった。以上により、(1)ある種の抗癌剤の抗腫瘍活性にアポトーシスが関与していること(2)bcl-2遺伝子がアポトーシスを抑制することにより細胞の抗癌剤感受性を低下させ得ること(3)抗癌剤が関与するアポトーシスにはbcl-2遺伝子により抑制される経路と抑制されない経路があることが示された。抗癌剤の作用機転とのアポトーシスとの関わりについては、耐性を示すadriamycin、CPT-11、mitomycin C がそれぞれトポイソメラーゼII阻害、トポイソメラーゼII阻害、DNAのアルキル化であり、DNA障害能をもつ以外は共通性が見い出せず、今後の作用機序の検討が必要と考えられた。アポトーシスに関与すると考えられる因子に働く薬剤のSBC-3/Bcl-2に対する感受性の変化のスクリーニングではProtein kinase A,C阻害剤、刺激剤、superoxide産生剤、cdc2キナーゼ阻害剤等を検討したが、明確な感受性の変化は認められなかった。

将Bcl-2基因掺入含有新霉素耐药基因的载体中，并通过脂肪触发将基因转移到人类小细胞肺癌细胞系SBC-3中，并通过选择Neomycin获得SBC-3/BCL-2。当通过MTT方法检查SBC-3/BCL-2细胞对各种抗癌药物的敏感性的变化时，当将父母菌株SBC-3细胞与顺苏德蛋白，eToposide，acnu，acnu，acnu，adriamycin，cistry，c.cpts c.cpts and-Cptry，c.cpts，甲基替代品，甲基替代品，甲基替代品时，观察到了凋亡的DNA片段化（这是凋亡的指标）。与SBC-3细胞相比，SBC-3/BCL-2分别为3.4、7.6和5.7倍，对Adrimycin，CPT-11和丝裂霉素C具有抗性。他们对其他代理人没有抵抗。此外，在转染剂获得了耐药性的药物中，在SBC-3/Bcl-2中未观察到DNA片段化在父母菌株中观察到DNA碎片的浓度。以上表明（1）凋亡与某些抗癌药物的抗肿瘤活性有关，（2）Bcl-2基因可以降低细胞对抗癌剂的敏感性，（3）涉及抗癌药物的凋亡，其中有些途径受到了未被抑制的途径抑制的途径。关于抗癌药物的机制与凋亡之间的关系，分别是拓扑异构酶II抑制作用，拓扑异构酶II抑制和DNA烷基化，抗性adriamycin，CPT-11和丝霉素C是抗癌药物II抑制作用，并且没有发现它们具有DNA障碍，因此未来的动作是必不可少的。在筛选对SBC-3/BCL-2敏感性的变化时，检查了对凋亡，蛋白激酶A，C抑制剂，刺激剂，超氧化物产生者和CDC2激酶抑制剂的作用的药物，但未观察到敏感性的明显变化。

项目成果

Okamoto-Kubo,S.,Nishio,K.et al.: "Apoptosis induced by etoposide in small-cell lung cancer cell lines." Cancer Chemother.Pharmacol.33. 385-390 (1994)

Okamoto-Kubo,S.,Nishio,K.et al.：“依托泊苷在小细胞肺癌细胞系中诱导细胞凋亡。”

Ohmori,T.,Nishio,K.et al.: "Apoptosis of lung cancer cells caused by some anti-cancer agents (MMC,CPT-11,ADM)is inhibited by bcl-2" Biochem.Biophys.Res.Commun.192. 30-36 (1993)

Ohmori,T.,Nishio,K.等人：“bcl-2 抑制某些抗癌剂（MMC、CPT-11、ADM）引起的肺癌细胞凋亡”Biochem.Biophys.Res.Commun。