高等動物におけるビタミンB_<12>補酵素合成機構の解明

高等动物维生素B_<12>辅酶合成机制的阐明

基本信息

批准号：
05760116
负责人：
渡辺文雄
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hagoromo Gakuen Junior College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット肝臓ミトコンドリア膜画分からビタミンB_<12>補酵素の合成に関与するNADH型およびNADPH型アクアコバラミンレダクターゼを精製し、その酵素化学的物質を解明した。NADPH型酵素はミトコンドリア膜より1%Triton X-100/1%デオキシコール酸で完全に可溶化され、各種クロマトグラフィーを用いて電気泳動的に均一にまで精製した。本酵素は分子量65000の単一のポリペプチドからなるフラボプロテインであった。酵素1モルあたり1モルのFADとFMNを含有していた。また、本酵素はミクロソームのシンクロムP450レダクターゼ(ミクロソームのNADPH型アクアコバラミンレダクターゼ)抗体と反応したが、ペプチドマッピングやフェノバルビタール誘導の挙動の相違から両酵素は異なるタンパク質であることが明らかとなった。一方、NADH型アクアコバラミンレダクターゼは1%TritonX-100で完全に可溶化されたが、DEAE-セファロースカラムクロマトグラフィーにより活性が顕著に消失したが、NADH-シトクロムcレダクターゼ(b-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼ複合体)活性とアクアコバラミンレダクターゼ活性は同一の挙動を示した。また、ミトコンドリア膜画分よりb-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼをそれぞれ精製し、再構成実験を行った結果、非常に高いアクアコバラミンレダクターゼ活性が検出された。これらの結果よりミトコンドリアのNADH型アクアコバラミンレダクターゼはb-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼ複合体であると結論した。

NADH型和NADPH型水生植物Ledactase与大鼠肝脏线粒体膜合成的合成维生素B_ <12>，以阐明酶化学酶。从线粒体膜上用1％Triton X-100/1％脱氧糖酸完全溶解NADPH型酶，并将其精制成各种色谱中的电动游泳。该酶是一种Flavos蛋白，由单个多肽组成，分子量为65,000。每摩尔每摩尔中包含1 mol和FMN。此外，该酶与肌化同步p450补充酶（Microsom的Nadph aquababara ramin Readactase）的抗体反应，但是肽映射和苯巴氏菌指南的行为差异表明，双酶是不同的蛋白质。另一方面，NADH型水芳胺LEDActase完全可溶于1％Tritonx-100，但是由于DEAE-CEPEPER ROOSE CALAM色谱法而引起的活性显着，但是NADH-Citochrome C Redactase（B-type type type citolome and Citolome b5 cilothrome b5 redactase）复合物活性和含水甲胺的编性活性表现出相同的行为。此外，从线粒体薄膜绘画中改进了B型毒素和毒素B5补染酶，并进行了重建的实验。从这些结果中，我们得出的结论是，线粒体的NADH型水akakobaramin Redactase是B型毒质和果质型B5补充酶复合物。