還元的TCAサイクルの鍵反応に関与する酸化還元因子

参与还原 TCA 循环关键反应的氧化还原因子

基本信息

批准号：
05760060
负责人：
石井正治
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760060/
关键词：
フェレドキシン還元的TCAサイクル

项目摘要

好熱・絶対独立栄養性水素細菌 Hydrogenobacter thermophilus の無細胞抽出液からフェレドキシンを単離し、同菌の炭酸固定経路(還元的TCAサイクル)に同物質が関与しているか否かを明らかにすることを目的とした。本研究過程で以下の点が明らかにされた。1 フェレドキシンのアッセイ法の改良当初は同菌由来のヒドロゲナーゼを用いることで実験系を組んでいたが、同酵素はフェレドキシンとの反応効率が低いことが示されたため、alpha-ケトグルタレートオキシドレダクターゼ反応を利用し、メトロニダゾール還元活性の回復という方法でアッセイを行うこととした。2 フェレドキシンの単離上記アッセイ法を用いて無細胞抽出液を各種カラムクロマトに供した所、好気的条件下ではフェレドキシンの失活が激しいことが示された。そこで、嫌気的にカラムクロマトを行った。無細胞抽出液を Q-Sepharose,DEAE5PW,Gel filtrationの各カラムクロマトに供し、クロマト的に単一な標品を得た。3 フェレドキシンの性質精製フェレドキシンは、精製alpha-ケトグルタレートオキシドレダクターゼと反応することが示され、還元的TCAサイクルへの還元力供給物質がフェレドキシンであることが示唆された。

我们从嗜热专性自养氢细菌嗜热氢杆菌的无细胞提取物中分离出铁氧还蛋白，并确定该物质是否参与同一细菌的二氧化碳固定途径（还原TCA循环）。在本研究过程中明确了以下几点。 1 铁氧还蛋白测定方法的改进最初，使用源自同一细菌的氢化酶建立了实验系统，但该酶与铁氧还蛋白的反应效率较低，因此我们决定使用α-酮戊二酸氧化还原酶反应进行测定恢复甲硝唑还原活性。 2 铁氧还蛋白的分离当使用上述测定方法将无细胞提取物进行各种柱层析时，表明铁氧还蛋白在有氧条件下严重失活。因此，柱色谱在厌氧条件下进行。将无细胞提取物进行Q-Sepharose、DEAE5PW、凝胶过滤柱层析，得到层析均匀的样品。 3 铁氧还蛋白的性质纯化的铁氧还蛋白可与纯化的α-酮戊二酸氧化还原酶发生反应，表明铁氧还蛋白是为还原性TCA 循环提供还原力的物质。