細胞分化に伴う細胞増殖必須遺伝子(ヒトTS遺伝子)の発現調節に関する研究

与细胞分化相关的细胞增殖必需基因（人TS基因）的表达调控研究

基本信息

批准号：
03671059
负责人：
竹石桂一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はヒトチミジル酸合成酵素(TS)遺伝子の5'上流域に結合する蛋白質性核内因子として、少なくとも3種類(NF-TS1、NF-TS2及びNF-TS3)をすでに同定している。また、それらのうち、NF-TS2はヒト前骨髄性白血病細胞(HL-60細胞)の活性型ビタミンD_3による分化に伴って減少するのに対して、NF-TS3は増加することを見出した。本年度は先ず核内因子の精製を試みたが、NF-TS2とNF-TS3は非常に失活し易く、精製が因難であったので、それらの機能を中心に解析した。第一に、核内因子NF-TS2及びNF-TS3と細胞の増殖性との関連性について検討した。そのために、ヒト末梢血のT細胞をPHAとIL-2で処理することによって、分化の場合とは逆に、細胞を増殖停止状態から増殖状態に移行させる実験系を用いて調べた。その結果、IL-2処理前後のT細胞の主な核内因子はNF-TS2で、有意な量的変化はなく、NF-TS3は検出されなかった。この結果は、上述のHL-60細胞を分化させた時の結果と全く異なり、NF-TS2及びNF-TS3と細胞の増殖性との間には一般的な関連性はないことが示された。次に、これらの因子の遺伝子発現における機能を探るため、ヒトTS遺伝子のプロモーター領域を含むが核内因子の結合部位を欠失させたDNA断片と、欠失させていない断片とを用いてCAT(クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ)アッセイを行なった。CATアッセイ用プラスミドをHeLa細胞にトランスフェクトした場合、核内因子の結合部位を含むDNA断片はCAT活性を促進したのに対して、そのプラスミドをTIG-1細胞にトランスフェクトした場合、同じDNA断片がCAT活性を抑制した。そのDNA断片に結合する主な核内因子は、HeLa細胞ではNF-TS2であり、TIG-1細胞ではNF-TS3であること、及び上述のCATアッセイの結果から、NF-TS2はヒトTS遺伝子の発現に対し促進的に作用するのに対し、NF-TS3は抑制的に作用することが示唆された。

我们已经鉴定出至少三种与人胸苷酸合酶 (TS) 基因 5' 上游区域结合的蛋白质核因子（NF-TS1、NF-TS2 和 NF-TS3）。我们还发现其中，NF-TS2随着活化的维生素D_3对人早幼粒细胞白血病细胞（HL-60细胞）的分化而减少，而NF-TS3则增加。今年，我们首先尝试纯化核因子，但由于NF-TS2和NF-TS3极易失活，纯化困难，因此我们将分析重点放在它们的功能上。首先，我们研究了核因子NF-TS2和NF-TS3与细胞增殖之间的关系。为此，我们使用了一个实验系统，其中用PHA和IL-2处理人外周血T细胞，将细胞从生长停滞状态转变为增殖状态，这与分化的情况相反。结果，IL-2处理前后T细胞中主要核因子为NF-TS2，数量无明显变化，未检测到NF-TS3。该结果与HL-60细胞分化时得到的结果完全不同，表明NF-TS2和NF-TS3与细胞增殖之间不存在一般关系。接下来，为了探索这些因子在基因表达中的功能，我们使用含有人类TS基因启动子区域但删除了核因子结合位点的DNA片段和未删除的片段（氯霉素乙酰转移酶）进行了测定。执行。当CAT测定质粒转染入HeLa细胞时，含有核因子结合位点的DNA片段促进CAT活性，而当该质粒转染入TIG-1细胞时，相同的DNA片段抑制CAT活性。与DNA片段结合的主要核因子是HeLa细胞中的NF-TS2和TIG-1细胞中的NF-TS3，并且从上述CAT测定结果来看，NF-TS2是人类TS基因。 TS3 的作用是促进 NF-TS3 的表达，而 NF-TS3 的作用是抑制它。