ラット青斑核のセロトニン生合成に関するハイブリダイゼ-ション組織化学的研究

大鼠蓝斑5-羟色胺生物合成的杂交组织化学研究

基本信息

批准号：
03670557
负责人：
飯島浩一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Cordellら('84)の2重免疫酵素学的標識複合体(APAAP)を用いるin situhybridization(LarssonとHougaard,'90)をラットの青斑核(LC)の交互連続cryostat切片(6μm)に適用し、serotonin(5ーHT)合成酵素tryptophan hydroxylase(TPH)mRNAがLCの全域にわたって小型及び中型神経細胞の約50%に検出できる事を見出した。この方法の特異性はNorthern blot hybridizationで検定した。なお、このmRNAのシグナルはLC膜内側端に近い少数の中心灰白質の神経細胞にも認められた。LC内在性の神経細胞分5ーHT合成能は現在のin situ hybridizationの結果のみならず免疫細胞化学的実験の所見からも強く支持される。即ち、Zamboni's固定のcrycostat(6μm)の交互連続切片のセットを、それぞれ5ーHT抗体又は、チロシン水酸化酵素(TH)抗体を一次抗体としてPAP法で(Sternberger,'86)で免疫染色し、又、5枚毎にcersyl violet染色して神経解剖学的にも対比検討した。5ーHT免疫反応性は、術前にpargylineと5ーhydroxytryptophan(5ーHTP)を腹腔内投与すると多数のLC細胞に検出されたが、その分布において、TH免疫反応性のLC細胞と完全に一致した。交互連続切片の免疫染色による対比で、神経伝達物質5ーHTとNAの共存が、ラットのLC神経細胞に強く示唆された。(1)ことに5ーHTの合成酵素TPH mRNAの脳内の存在証明の報告はまだ乏しく、5ーHT合成能は松果体、縫線核や最後野(AghajanianとGallager,'75;ChanーPalay,'76;Nishida et al.'85)だけにこれまで限定されてきた。更に、(2)NAと5ーHTの共存はSteinbusch('84)以来、まだ報告されていないLCの知見である。なお、LCの腹内側端に近いところまれに少数の5ーHT細胞がありTPH mRNAを示す表現見は、これらの細胞が背側縫線形に由来するとの従来の仮説(SladekとWalker,'77)を支持している。

使用 Cordell 等人 ('84) 的双免疫酶学标记复合物 (APAAP) 进行原位杂交 (Larsson 和 Hougaard, '90)，应用于大鼠蓝斑 (LC) 的交替连续低温切片 (6 μm)。发现在整个 LC 中大约 50% 的中小型神经元中可以检测到血清素 (5-HT) 合酶色氨酸羟化酶 (TPH) mRNA。通过Northern印迹杂交测试了该方法的特异性。在靠近 LC 膜内缘的中央灰质的少量神经元中也观察到了这种 mRNA 信号。 LC在神经元中合成5-HT的内源能力不仅得到当前原位杂交结果的有力支持，而且得到免疫细胞化学实验结果的有力支持。即，使用 5-HT 抗体或酪氨酸羟化酶 (TH) 抗体作为一抗，通过 PAP 方法 (Sternberger, '86) 对 Zamboni 固定低温恒温器 (6 μm) 的一组交替连续切片进行免疫染色。每 5 个图像用 ceryl violet 染色以进行神经解剖学比较。术前腹腔注射帕吉林和5-羟色氨酸（5-HTP）时，在大量LC细胞中检测到5-HT免疫反应性，但其分布与TH免疫反应性LC细胞完全不同。交替连续切片的对比免疫染色强烈表明大鼠 LC 神经元中神经递质 5-HT 和 NA 共存。 (1) 特别是，证明大脑中存在 5-HT 合酶 TPH mRNA 的报道仍然很少 -Palay,'76;Nishida 等人'85)。此外，(2) NA 和 5-HT 共存是 LC 中的一个发现，自 Steinbusch ('84) 以来尚未有报道。此外，LC 腹内侧边缘附近存在少量 5-HT 细胞，这些细胞表现出 TPH mRNA，这与这些细胞起源于中缝背侧的传统假设不一致（Sladek 和 Walker，2003）。）。