リジルオキシダ-ゼ遺伝子のクロ-ニング

赖氨酰氧化酶基因的克隆

• 批准号: 03670181
• 负责人: 塩田 千代
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670181/
• 关键词: リジルオキシダ-ゼ; エ-ラ-ス・ダンロス症候群

コラ-ゲンやエラスチンの分子内あるいは分子間架橋形成に必須であり、線維化を伴う各種病変に密接に関係する酵素であるリジルオキシダ-ゼ(lysyl oxidase)のヒトのcDNAクロ-ニングを行った。当初、クロ-ニングには我々がすでに得ていたヒトのリジルオキシダ-ゼに対する抗体を用いる予定であったが、P.C.TrackmanらによってラットのcDNAの塩基配列が報告されたので計画を変更し、まずpolymerase chain reaction(PCR)法によってラット大動脈mRNAの逆転写産物から550塩基長のリジルオキシダ-ゼcDNA断片を得た。この断片をプロ-ブとしてヒト胎盤cDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところ861塩基長の陽性クロ-ン1個を得た。この陽性クロ-ンの塩基配列を決定しラットcDNAの塩基配列と比較したところ、96%のホモロジ-があり、ヒトリジルオキシダ-ゼcDNAの翻訳領域の3'側約半分をカバ-する断片であることが確認された。さらに完全長cDNAおよびgenomic DNAのクロ-ニングを進める一方、得られたヒトリジルオキシダ-ゼcDNAをプロ-ブとしてchromosomal in situハイブリダイゼ-ションを行い、リジルオキシダ-ゼ遺伝子が第5染色体上にあることを明らかにした。これまでIX型EhlersーDanlos症候群はリジルオキシダ-ゼに異常があると考えられてきたが、IX型EhlersーDanlos症候群は伴性遺伝することから、本症候群におけるリジルオキシダ-ゼ活性の異常は一次的なものではないことが明らかになった。

我们克隆了赖氨酰氧化酶的人类 cDNA，这种酶对于胶原蛋白和弹性蛋白分子内和分子间交联的形成至关重要，并且与纤维化相关的各种病变密切相关。最初，我们计划使用我们已经获得的抗人赖氨酰氧化酶的抗体进行克隆，但是当P.C.报告大鼠cDNA的碱基序列时，从大鼠的逆转录产物中获得了550个碱基长的赖氨酰氧化酶cDNA片段。主动脉 mRNA 采用链式反应 (PCR) 方法。当我们以该片段为探针筛选人胎盘cDNA文库时，获得了1个长度为861个碱基的阳性克隆。当我们确定该阳性克隆的核苷酸序列并与大鼠cDNA的核苷酸序列进行比较时，我们发现它具有96％的同源性，并且是覆盖了人翻译区3'端约一半的片段。已证实存在赖氨酰氧化酶cDNA。在进行全长cDNA和基因组DNA的克隆的同时，以获得的人赖氨酰氧化酶cDNA作为探针进行染色体原位杂交，确认了赖氨酰氧化酶基因位于5号染色体上。迄今为止，IX型埃勒斯-当洛斯综合征被认为是由赖氨酰氧化酶异常引起的，但由于IX型埃勒斯-当洛斯综合征是伴性遗传，因此该综合征中赖氨酰氧化酶活性的异常被认为是由赖氨酰氧化酶异常引起的。事实证明这不是一个事情。